Tn5转座酶-Max

Tn5转座酶凭借其"cut-and-paste"机制，实现了DNA片段化和接头连接的同步完成(Tagmentation)，将建库时间从数小时缩短至10分钟左右，已广泛应用于全基因组测序、ATAC-seq、转录组及单细胞测序等领域。然而，在实际应用中，Tn5转座酶仍面临微量样本建库成功率低、酶用量成本高、对特殊样本处理效率不足等挑战。

舒桐科技Tn5-Max转座酶，是针对催化活性进行系统性优化的全新产品。我们通过对酶的催化活性中心和底物结合区域进行理性设计与多轮定向进化，成功提升了其底物结合效率、催化中心活性及产物释放动力学。Tn5-Max在实现更高催化效率的同时，显著改善了建库均一性并降低了酶用量，为高通量测序应用，尤其是对成本和样本量敏感的场景，提供了更优的解决方案。

图1 Tn5-DNA复合物的三维结构

 

1 . 产品信息

 

2. 产品组分

 

3. 产品特点

① 催化活性显著提升：通过对催化核心的优化，Tn5-Max展现出远超野生型Tn5的片段化效率，可在更短时间内或更低酶用量下完成理想的DNA片段化。

② 微量样本建库能力更强：高活性确保了对低起始量DNA（<1ng）的高效转化，显著提升微量样本和单细胞测序的建库成功率与数据质量。

③ 基因组覆盖度更均匀：优异的片段化效果带来了更均一的基因组覆盖，有效减少“测序盲区”，确保关键变异位点的检出。

④ 酶用量更少，成本更优：在达到同等建库效果的前提下，Tn5-Max的推荐用量比野生型Tn5减少约40%，为大规模、高通量测序项目带来显著的成本优势。

⑤ 文库质量更稳定：片段分布更集中于理想建库区间（150-500bp），减少了后续扩增和质控的不确定性，提高了文库构建的成功率和稳定性。

 

4. 应用领域

基于Tn5-Max的高活性和均一性优势，以下场景将获得显著收益：

4.1 液体活检

① 样本起始量极低(通常<10ng)

② 需要极高的DNA利用率以检出低频突变

③ 均一的覆盖确保不遗漏关键变异位点

4.2 单细胞全基因组测序

① 每个细胞仅有~6pg基因组DNA

② 高活性酶能最大化DNA转化效率

③ 均一覆盖提高单细胞CNV检出率

4.3 大规模测序项目

① 人群队列研究、肿瘤筛查项目

② 酶用量降低40%带来显著成本优势

③ 高均一性减少补测次数

4.4 表观基因组学研究

① ATAC-seq等需要精准片段化

② 均一的切割确保信号不被覆盖偏差干扰

③ 提高峰值检出的灵敏度和特异性

 

5. 产品性能展示

5.1 催化活性显著提升

测试条件：50ng Human基因组DNA，55°C反应10分钟

数据解读：

① 片段化更充分：在相同反应条件下，Tn5-Max产生的DNA片段更小

② 片段分布更集中：主峰集中在建库理想区间(150-500bp)，减少过长或过短片段的比例

片段化偏小的深度意义：

更小的片段化意味着更高的酶切效率，这带来三大核心优势：

(1) 更高的DNA利用率

① 片段化充分意味着DNA被更彻底地转化为可测序文库

② 减少了大片段DNA的浪费，特别是在珍贵样本中每一个碱基都至关重要

(2) 更均匀的基因组覆盖

① 小片段更容易实现全基因组的均匀覆盖

② 避免因大片段富集导致的测序深度不均

③ 降低了需要的测序深度，节约成本

(3) 更稳定的建库质量

① 片段分布集中在最佳区间，减少了后续文库处理的不确定性

② 提高了PCR扩增效率和均一性

③ 降低了文库QC失败率

5.2 NGS测序均一性：Fold80指标

测试条件：50 ng Human基因组DNA，30M测序深度

Fold80指标解读：

Fold80是衡量测序覆盖均一性的金标准指标，定义为覆盖80%目标区域所需的测序深度差异倍数。

Fold80越低 = 覆盖越均一

Tn5-Max的Fold80为1.4，相比Tn5-WT的2.0，均一性提升30%

实际意义：

① 减少"测序盲区"，避免关键位点因覆盖不足而遗漏

② 降低所需测序深度，同样的测序量可获得更完整的基因组信息

③ 对于临床诊断和单细胞应用，更高的均一性意味着更可靠的检出率

5.3 酶用量优化

测试条件：50ng DNA起始量，达到相同片段化效果所需酶量

酶用量减少约40%，适合大规模、高通量应用场景。