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RT
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见标签
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999
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鹿森生物
- 规格:
5MG

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文献和实验。在很多公司的手册中有对各种酶特性的描述,大家不妨比较一下。提醒一点:高保真酶除了我所知的Merck的Easy-A 以外,都不会在3’端加A尾巴(因为其3’-5’外切酶活性),所以做TA克隆的时候需要一点小诀窍——扩增完了再加普通Taq去加个A.另外还有个方法:将Taq DNA聚合酶同带有3'到5'外切核酸酶活性第二种聚合酶混合在一起可以获得比单独Taq DNA聚合酶高的保真度,并可以得到高产量及扩增长模板。 四、Mg2+浓度 镁离子影响PCR的多个方面,如DNA聚合酶的活性,这会影响产量
【原创】从用PRIMER premier设计引物到查看您所设计的引物会不会有目的产物,以人的APP基因为例
倍,也可以只稀释3-5倍或者不稀释,反正都能做得出来PCR,只是为了不浪费cDNA,完全可以稀释10倍以上(通常稀释10倍后取1ul做定量PCR,在20循环左右的时候荧光信号就可以被检测到,反正我的是这样的,才哥稀释了更多倍,才哥稀释了100倍) 2×Mix (即2×的酶,dNTP, Mg离子都混好了的那种) 15ul 引物 1uM的引物对 10ul 模板 1:10稀释后的cDNA 1ul 补水 4ul 也可以直接这样,就不用补水了,反正引物多点点没事,而且这样并不多,具体可以参见酶
TE的引物在-20℃可以稳定保存6个月,但在室温(15℃到30℃)仅能保存不到1周。干粉引物可以在-20℃保存至少1年,在室温(15℃到30℃)最多可以保存2个月。 3. optimize reactants concentration a. magnesiom ions Mg离子的作用主要是 dNTP-Mg 与核酸骨架相互作用并能影响Polymerase的活性,一般的情况下Mg的浓度在0.5-5mM之间调整,同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度,对实时
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