T4 RNA Ligase

T4 RNA Ligase，即T4 RNA连接酶，是一种ATP-依赖的可以催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。
T4 RNA Ligase主要用于RNA和RNA之间的连接，连接时需要5'磷酸基团和3'羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接，也可以进行RNA分子(最短8个碱基)的环化连接。
T4 RNA Ligase可以用于RNA和单核苷酸之间的连接，单核苷酸必须为5'和3'均磷酸化的形式，此时常用于RNA的3'末端标记。
T4 RNA Ligase也可以用于DNA和RNA之间的连接。当DNA提供5'磷酸基团，RNA提供3'羟基时，连接效率较高；当DNA提供3'羟基，RNA提供5'磷酸基团时，连接效率非常低。
T4 RNA Ligase也可以用于DNA和DNA之间的连接，但连接效率非常低。主要用于DNA的环化连接，例如5' RACE中的cDNA环化。DNA和DNA之间的连接尽管可以进行，但比较困难。
用途：用RNA 3'末端标记；RNA和RNA分子间连接；寡核苷酸的环化；tRNA修饰；5' RACE中寡核苷酸连接到cDNA单链；在蛋白质特定位点引入非天然氨基酸。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：37℃30分钟内，催化1 nmol 5'-[³²P]-(A)_12-18成为磷酸酶不能消化的环形产物所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl₂，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5'-[³²P]-(A)_12-18(10μM in 5'-termini)。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
酶储存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl₂，100mM DTT。
失活或抑制：70℃加热10分钟可使T4 RNA Ligase失活。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存。
注意事项： 
反应体系中需加入的ATP量取决于连接反应的类型；在最终反应体系中BSA推荐浓度为0.1mg/ml。
使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。