细胞蛋白酶体提取试剂盒

实验操作篇

，不能得到足够的菌量来抽提质粒，摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型，导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多：容易导致裂解不充分，且容易超过硅胶膜柱的承载上限，最终使得质粒提取效率降低，建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当：比如在加入缓冲液重悬菌体时，菌体没有充分分散悬浮，导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解，可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂（QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂），均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用

qPCR 实验中遇到这 3 个问题怎么办？

如果您的样本是组织，取样的过程非常重要。组织内部是有内源性 RNase 存在的，组织离体后内源性 RNase 则开始发挥作用，RNA 产生降解。所以离体的组织必须立马放在液氮中速冻，之后转移至 -80℃ 长期保存，且避免反复冻融。研磨组织的过程中需要保证在液氮环境中研磨。RNA 提取的过程中，保证样本的上样量不超过提取试剂盒说明书中规定的最大上样量，上样量过多，同样会造成 RNA 降解。 ②如果您的样本是细胞，则样本搜集过程要简单的多了，只要保证细胞状态良好（细胞状态差也容易造成提取的 RNA 降解

CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting

%；2. 72 h 后收集细胞提取基因组 DNA（按照基因组 DNA 提取试剂盒的说明书操作）；3. 使用事先设计好的引物进行 PCR 扩增，这里使用的酶是 NEB 公司的 Q5 high-fidelity Polymerase，一切按照该酶的说明书严格操作；4. 将目的条带切割下来并使用胶回收试剂盒回收 DNA 条带，一切按照胶回收试剂盒说明书进行操作；5. 回收后的 DNA 样本，经 T7 Endonuclease I 酶解验证错配 DNA，部分结果如下：T7 EI验证成功，开始正式实验时间飞逝，上次说