DMEM/F-12 培养基（含L-谷氨酰胺，不含HEPES）

少突胶质细胞原代培养

胶质细胞层的上面然后运用旋转摇床以260rpm 18小时摇荡分离，通过30μm的尼龙网过滤，然后细胞悬液接种到含无血清培养基的培养皿中。培养基成分：DMEM-Ham‘s F-12混合物（1:1），10mM HEPES，0.1%牛血清蛋白，25μg/mL 人铁转蛋白，30nM三碘甲状腺氨酸，20nM氢化可的松，20nM黄体酮，10nM 维生素H，5μg /mL胰岛素，16μg/mL腐胺，30nM硒，50U/mL 青霉素和50μg/mL 链霉素，还含有2.5ng/mL 血小板源性生长因子AA和2.5ng/mL

细胞培养基的使用方法（微孔滤膜过滤除菌）

性，一般与激素或其它物质起相互协同或加成作用。另一种常见的添加物就是血清替代物，目前已有许多可完全或部分替代传统培养液中血清成分的商业产品，其稳定性较好，但批次间仍有差别，产品的成分也不很确定。2、细胞培养基配制 2.1 干粉培养基原倍液的配制 1）配制过滤除菌的细胞培养基 1）阅读培养基使用说明，确定需要添加何种添加剂（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等）。 2）根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体

细胞培养用液

细胞原代培养时经常使用，胶原酶作用的对象是胶原组织，因此不容易对细胞产生损伤。胶原酶的使用浓度为0.1-0.3mg/L或200000U/L,作用的最佳pH为6.5。胶原酶不受Ca2+、Mg2+及血清的抑制，配制时可用PBS。 三、pH调整液:常用的有HEPES液和NaHCO3溶液。 1.NaHCO3溶液：NaHCO3是培养基中必须添加的成分，一般情况下按说明书的要求准确添加，以保证培养基在5%CO2的环境下pH达到设计标准。如果是封闭式培养，即不与5%CO2的环境发生交换达到平衡