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蛋白质从头测序及N,C端测序

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  • 蛋白质从头测序技术服务蛋白质从头测序及N,C端测序
  • 北京
  • 2025年12月10日
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    • 服务名称

      蛋白质从头测序及N,C端测序

    • 提供商

      西农生(北京)生物技术有限公司



    1.N端测序


    服务内容  艾德曼法
     
    本公司可开展蛋白质的N-端氨基酸序列测定工作:一次可以连续测定30个以上氨基酸


    样品要求
    1.含量:建议送样量不低于 50pmol
    2.状态:液体、冻干粉或PVDF转膜样品均可
    3.纯度:建议95%以上纯度
    4.性质:注明其溶解性,挥发性,毒性/腐蚀性等
    5.信息:表观分子量;修饰信息;样品组织来源及制备方法信息
    6.其它:A. N端未封闭
    B.缓冲液中不要包含氨基酸成分,如甘氨酸
    C.不含干扰物质
    D.样品需要转膜制备时,建议将样品交由我们代为处理,并同时提供相应的电泳方法与带有mark的电泳照片
    E. 样品如有特殊理化性质(如膜蛋白,特殊酶活性,特殊结构等),请详细说明
    F. 若为已知序列样品,请告知预期序列信息



    2.蛋白denovo测序:

    适用于多氨基酸残基(如几百个以上)的多肽及蛋白测全长,

    酶切加质谱,软件分析

    酶:Trypsin、Chymotrypsin、Glu-C、Lys-C、ASP-N

    抗体和重组蛋白全长测序常见问题
    1,测序需要多少量抗体?
    (1) 蛋白从头测序标准的送样量是 100ug,纯度是 90%以上。
    (2) 有最低 20ug 测序成功的经验。蛋白纯度对测序结果的影响较大,杂的抗体蛋白、
    同源蛋白及 BSA 等会对样品测序产生干扰,从而影响实验结果。
    (3) 蛋白溶解缓冲液标准的送样建议是使用 PBS Tris 缓冲液体系,此外如果有甘油、
    BSA、去垢剂、盐等成分,我们会有相应的方法做一些纯化处理,所以是不影响测
    序结果的。
    2,测序是单抗还是多抗?
    (1) 单抗,重组蛋白。
    (2) 蛋白从头测序和蛋白的大小长度无关,单抗、Fab/Fc、纳米抗体、重组蛋白、多肽、
    荧光标记抗体(如流式抗体 FITCCyc5PE 等标记的抗体)、交联抗体(蛋白交
    联在 Beads 上)等均可以进行从头测序。
    (3) 样品糖基化和翻译后修饰不会影响测序:数据分析时会将可能的翻译后修饰和糖基
    化修饰考虑在内,不影响样品本身测序结果。
    3,测序的周期是多长?
    (1) 符合送样要求,从开始检测到报告发送标准的服务周期是 14 个工作日。
    (2) 符合送样要求,可加急,做到 14 个自然日。
    (3) 顺利的话,某些项目可加急做到 7 个工作日(9 个自然日)
    4,测序的结果怎么提供?
    1)邮件发送结果
    2)完整报告内容包括但不限于以下信息
    完整的蛋白氨基酸序列,抗体包括重链和轻链序列,恒定区和可变区。
    完整分子量验证信息,将实际测得的分子量与理论序列分子量进行比对来验证序列
    的准确性(偶联到 beads 上的抗体不提供抗体完整分子量信息)
    完整序列的肽段覆盖图,每个位点的氨基酸有超过 3 种不同的肽段支持。
    抗体可变区肽段的二级质谱图支撑。
    ⑤I/L 鉴定的可信度分析。
    5,测序的准确性如何?
    (1) 测序结果保证全序列覆盖和 100%序列准确,每个位点的氨基酸有超过 3 种不同的
    肽段支持,每个氨基酸在质谱图里有强的碎片离子峰证据。测序结果结合软件算法
    和人工检验,双重保证序列准确性。
    (2) 针对于单抗,有一个区别于经典款的保活款单抗测序项目(保活款与经典款测序流
    程一致,区别只在于价格和风险承担方式,一般不建议):
    1
    交付 3 毫克重组抗体。客户测试亲和性成功以后交付轻重链全长序列以及报告,
    价格比全长测序服务增加 1.0 万元,周期增加 20 工作日;
    2
    客户检测没有活性,不收取费用、不交付轻重链全长序列和报告;

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