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CUT&Tag

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      杭州开泰生物

    • 服务名称

      CUT&Tag

    CUT&Tag—DNA-蛋白质相互作用研究技术

    • CUT&Tag技术是一种研究蛋白质-DNA互作的新方法。该技术使用磁珠吸附活细胞,洋地黄皂苷打开细胞膜的通透性;pA-Tn5转座酶在抗体引导下精确结合靶蛋白附近的DNA序列,由于Tn5连有测序接头,可以直接在片段化的 DNA 两端添加接头,最终通过PCR扩增获得完整的文库。
    • 产品细节图片1CUT&Tag建库原理图

    应用方向

    1、DNA组蛋白修饰研究(组蛋白甲基化、乙酰化及新组蛋白修饰:乳酸化、磷酸化等);
    2、DNA-转录因子互作研究(探究转录因子结合位点的分布规律、转录因子之间的合作规则;基因转录调控的具体机制);
    3、增强子/超级增强子分析(鉴定超级增强子、结合转录组测序结果确定所调控的靶基因);
    4、组学验证手段(通过其他组学找到潜在结合的转录因子或是组蛋白修饰后进行验证);

    信息分析

    CUT&Tag测序项目,通过对获得的高质量reads,进行Peak calling及motif分析,高效预测相关基因, 进行功能富集分析、预测特异蛋白的功能,组蛋白染色体结合图谱以及DNA的表观修饰。
    分析内容 解决问题
    测序数据质量评估 过滤掉低质量数据,保证数据质量
    参考序列比对分析 唯一比对的 reads 分布统计
    peak calling 定位组蛋白修饰/转录因子结合位点
    peak注释 鉴定目标组蛋白修饰/转录因子潜在调控的靶基因
    差异 peak 分析 分析DNA-蛋白互作在不同处理条件下的差异
    相关基因功能分析 Peak/差异 peak 相关基因 GO、KEGG 富集分析
    motif 分析 目的转录因子结合的Motif序列
    (转录因子对应的已知Motif & 转录因子对应的新的Motif)

    关联分析

    CUT&Tag与RNA-seq关联分析

    1. 整体层面的关联

    1.1 整体信号分布展示

    1.2 不同表达⽔平基因的CUT&Tag 信号分布展示

    1.3 所有基因的CUT&Tag 信号热图

    1.4 所有基因启动子区域CUT&Tag信号与基因表达量关联密度散点图

    2.差异表达基因对应表观信号分布

    2.1 差异表达基因的CUT&Tag 信号

    2.2 差异表达基因的RNA-seq和CUT&Tag 信号热图

    2.3 差异表达基因上的CUT&Tag 信号累计分布图

    3.差异峰区域相关的基因表达变化情况

    3.1 CUT&Tag 信号变化与表达变化的热图

    3.2 差异峰相关基因的FPKM累计分布图

    4. 差异峰区域与差异表达基因的关联
    4.1 CUT&Tag 和RNA-seq的四象限图
    4.2 差异峰基因和差异表达基因的韦恩图
    4.3 GO富集分析
    4.4 KEGG富集分析

    送样建议

    样本类型 样本状态 送样建议
    细胞样本 冻存 每份≥40万,冻存前活性>90%,建议送备份
    新鲜 每份≥20万,冻存前活性>80%,建议送备份
    动物组织 新鲜/冻存 常见组织≥40 mg
    心、肾、神经等组织≥50mg
    植物组织 新鲜/冻存 幼嫩组织叶片≥0.3g
    种子、根等组织0.5~1g
    注:抗体浓度需≥0.2μg/μl,若低于0.2μg/μl,需进行抗体评估。
    • 一抗建议:

      请选择ChIP级别的一抗,提供未稀释的一抗原液。送样前请联系销售提供一抗的说明书,以方便后续项目进行。具体的送样要求请详询各地区销售技术人员。

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