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载基生物
▶ 服务介绍
油红O是很强的脂溶剂和染脂剂,较易与甘油三脂结合呈小脂滴状,与磷脂结合力稍差。其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂肪染色。染料在冰冻切片内脂质的溶解度较在原溶剂中的溶解度更大,所以在染色时染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。脂肪的阳性染色结果呈橘黄至红色,具体颜色因脂质浓度而定。因此,油红O染色方法可用于检测组织或细胞中脂肪油滴的存在和数量,尤其适用于脂质代谢疾病的研究。
▶ 实验仪器与试剂
▶ 实验步骤
1.冰冻切片固定:切片于4%多聚 甲醛固定5min,蒸馏水洗1min;
2.滴加试剂A(油红O缓冲液)处理5min;
3.倾去多余试剂,滴加提前预热的试剂B(油红O染色液),避光孵育15min;
4.倾去多余染液,滴加试剂C(油红O染色分化液)处理3min,蒸馏水洗1min;
5.滴加试剂D(Mayer苏木素染色液)处理2min,自来水洗5min;
6.甘油明胶封片;
7.显微镜镜检:图像采集分析
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文献和实验油红 O属于偶氮染料,是很强的脂溶剂和染脂剂,与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类,它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置人染液时,染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中,使组织内的脂滴呈橘红色。 一、油红O染液的配制 1.油红O 1g 异丙醇 100ml 2.油红O 足量 异丙醇 100ml 配成油红O饱和溶液,使用时以油红O饱和液一份加蒸馏水两份,过滤后使用。 二、染色程序 1.切片用甲醛―钙
组织切片的免疫酶标抗体染色法 1)4%多聚甲醛固定的组织置15%~20%蔗糖PBS中漂洗,4℃过夜或组织块下沉至 杯底; 2)制作30~40um厚的振动切片或冰冻切片,PBS漂洗; 3)2%H2O2甲醇处理,室温20分钟,封闭内源性过氧化物酶活性; 4)1%BSA室温孵育15分钟; 5)第一抗体4℃孵育12~24小时,PBS漂洗; 6)HRP或生物素标记的第二抗体室温孵育30―60分钟,如系生物素标记的第二抗体,反应后则需进一步按ABC法要求操作
无论是在教学科研中,还是在病理诊断领域,病理切片染色是不可缺少的环节。其规范操作流程包括取材、固定、脱水、包埋、切片、染色、结果分析等,每个步骤都有各自的难点和注意事项。本次讲座主要涉及组织预处理方法和注意事项,以及石蜡切片的免疫组织化学染色技术的原理、操作流程和结果分析等经验分享。
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