SpectBlue 考马斯亮蓝替代快速染液

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

常用的微量蛋白质快速测定方法。 考马斯亮蓝G-250染液的配制：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1000mL。此溶液在常温下可放置一个月。 采用Bradfold法进行蛋白定量，以1 mg/mlBSA 制作标准曲线。 首先，配1mg/ml BSA(1mg BSA溶于1ml三蒸水)，按下表配置梯度浓度的标准溶液。 浓度  

【求助】关于一种蛋白western的问题

分子量这么小，用的SDS-PAGE胶浓度大一点，15%，跑胶时间不用太长，看见溴酚蓝跑的分离胶的中或中下部就停了，marker应该有专门小分子量预染marker，你找试剂公司的人跟他们讲一下你的要求，一般他们会有合适推荐给你的。转膜条件得摸，可以先按照实验室经常用的转膜条件试一下，如果是实验室转膜的目的蛋白分子量比如40kd用2h，你可以用1个小时试一下，转完以后的SDS-PAGE胶可以放到考马斯亮蓝染液染一下，看看小分子量蛋白转的情况，一抗先按照说明书建议的最高浓度做，二抗按照你所在实验

考马斯亮蓝G—250染色方法

一、原理：考马斯亮蓝G—250法于1976年由Bradform建立。考马斯亮蓝G—250具有红色和蓝色两种色调，在酸性溶液中，其以游离态存在呈棕红色，当它与蛋白质通过疏水作用结合后，变为蓝色。色素对可见光谱的最大吸收值从465nm转移到595nm处。蛋白质和色素的结合反应很快速，约在2分钟左右的时间内达到平衡，在室温1小时之内是稳定的。在0．01一1.0mg蛋白质／m1范围内，蛋白质含量与A 595值呈正比。二、染液配制： 100mg的考马斯克蓝G—250溶解于50m1 95％的乙醇中，加入