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广州市左克生物
产品简介:
品牌:FINDROP/方舟
货号:FD-Q08S
产品名称:八孔单通道 qPCR仪
产品规格:
品牌介绍:
方舟生物安全科技(广州)有限公司成立于2020年6月,注册资金1000万元,是广东美格基因科技有限公司(简称“美格基因”)的全资子公司。
方舟生物依托母公司美格基因的科研力量,专注于微生物领域的科研创新、产品研发及产业化,目前已完成核酸提取系列试剂、qPCR检测系列试剂、高通量测序建库系列试剂、全自动核酸提取仪、基于物联网的荧光定量PCR检测仪、全自动核酸提取及检测一体机、全自动蛋白免疫印迹仪等产品的研发、生产及销售。2022年12月,方舟生物通过高新技术企业认证。
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文献和实验几个复孔,选择重复性好的 CT 值参与计算。 (2)CT<30,重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法:从以下几个方面进行问题的排查:①加样准确度;②移液器吸取液体的准确度;③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样,减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系,并且增加模板的稀释梯度,大体积加样。如:原液 cDNA 添加 1μl,可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍,添加 5μl,使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA,通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液,要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值,在操作过程中,还需要根据所用
为大家介绍qPCR引物设计的相关原则,并详细讲解靶基因序列检索以及常用引物设计软件,最后和大家分享qPCR引物实验验证,更多干货与你分享!
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