- ￥880
- BNCC
- BNCC359026
- 2025年08月19日
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![DH5α（含pBiT1.1-N [TK-LgBiT]质粒）大肠杆菌](https://img1.dxycdn.com/p/s14/2025/0818/870/8066323092845237591.jpg!wh200)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
见包装
- 保质期：
见包装
- 英文名：
Escherichia coli Stbl3(pAdtrack-CMV)
- 库存：
现货
- 供应商：
广州市左克生物
- 规格：
冻干粉
产品简介:
品牌：BNCC
货号：BNCC359026
产品名称：Stbl3（含pAdtrack-CMV质粒）大肠杆菌
规格：冻干粉
品牌介绍:
北纳生物是一家专注于细胞、微生物菌种领域,集研发、生产和销售为一体的生物高科技企业,设有细胞库、微生物菌种库,细胞培养、菌种培养、分子生物学实验等实验室,全方位满足您的需求。
说明：1、细胞&菌种等产品规格有多种时，默认发第一种规格，不同规格价格不同，具体找客服联系； 2、北纳细胞&菌种货期可参考：冻存细胞现货当天可发出。复苏细胞需要7-15个工作日；菌种一般默认发冻干粉；其他如菌液或者平板等形式需要7-15个工作日。
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文献和实验（细菌内同源重组AdEasy System）一、目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例）步骤1、选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒，以备共转化使用。二、共转化 1、大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 （1）从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌，接种于LB
-DNA液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7 培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP，可观察到绿色荧光）。 四 重组病毒鉴定 1 转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2 取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2 方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
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