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联硕生物
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250ul
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文献和实验【专题讨论】Tricine-SDS-PAGE胶的使用方法与心得(可分离8KD--280KD)
2 mL AB-3 1 mL 250 uL Gel-Buffer(3*) 1.65 mL 750 uL 甘油 0.5 mL — 10%AP 25 uL 22.5 uL TEMED 2.5 uL 2.25 uL (这个配方来自DXY,今天又回来了,呵呵) 3*Gel-Buffer 配方:(200mL量) Tris-Base 48.44g Tris-HCl 31.52g SDS 0.6 g pH 8.45,很难溶,可以60°C水浴促进溶解。 AB-3 (100mL量
和280KD都做出来了) 分离胶 积层胶 ddH2O 1.85 mL 2 mL AB-3 1 mL 250 uL Gel-Buffer(3*) 1.65 mL 750 uL 甘油 0.5 mL — 10%AP 25 uL 22.5 uL TEMED 2.5 uL 2.25 uL (这个配方来自DXY,今天又回来了,呵呵) 3*Gel
V转移25-30分钟。转移后的凝胶放到考马斯亮蓝R-250中染色,无明显条带显示表明转移效果较满意。 3.3 封闭 在25℃条件下,PVDF膜放入封闭液中(封闭好,以防液体挥发),以每分钟60转 恒温摇床上振荡60分钟。 3.4 一抗结合 依据抗体说明书的有效浓度,使用PBST和封闭液(1:1)来配置一抗,混合均匀。(例如膜为4×7.5cm2,配制4ml GAP-43(1:400):2ml封闭液+2mlPBST+10ul抗体) 将PVDF膜放在一抗中。4?C孵育过夜
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