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99
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联硕生物
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500ml
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文献和实验Y27632 - - 10μM - DMSO - - - 10% 组织处理 1、将取样培养基中的组织转移到培养皿中,用 PBS 多次冲洗至液体变澄清。然后用无菌手术刀剔除脂肪及坏死组织。 2、将组织切割为 1–2 mm3 的小块,此步骤可以留存适量组织用于测序、免疫组化分析等。 3、将所有剩余的组织碎片收集到 30 ml 锥形管中,加入 8 ml 解离培养基,并在 37°C条件下解离 1-2h。每隔 20min,利用移液器机械吹打
处理 1、将新鲜 CRC 组织样本放入预冷的 PBS 中,剔除脂肪组织和坏死的肿瘤组织(通常为黄色或白色),只选取活的肿瘤组织(通常为粉红色)。 2、将 CRC 组织转移到含有 5 mL 预冷的 PBS 溶液中清洗,去除血液和碎片。为防止污染,需要多次重复此步骤至液体变澄清。 3、吸出 PBS,将组织切割为 1-2 mm3 的小块,此步骤可以留存适量组织用于测序、免疫组化分析等。 4、将剩余组织块切碎,并加入 1 ml 预冷的类器官培养基,用 p1000 吸头将肿瘤碎片悬浮液转移到含有 5 ml 解离培养基
板液体每孔在 2ml 左右,不宜太多,或者太少。取两个 1.5mlEP 管,记为 A 管,B 管,每个 EP 管加入 250ul Opti-MEM I,然后 A 管加入 5-10ul lipofectamine 2000,B 管加入 100pM-200pM 的 siRNA(见买来的 siRNA 说明书),然后静置 5min,混合在一起,静置 20min,用 AB 混合液加入到 1.5ml 的无血清培养基 C 内,混匀; 将六孔板里的细胞的液体吸出,用 PBS 清洗两遍; 将 ABC 混合液 2ml
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