胰蛋白酶消化液，AB64508-100ml

家兔椎间盘(intervertebral disc )细胞的体外培养方法

Material and method：Material :1、培养皿、培养瓶、烧瓶、试管等。2、分离组织需要的眼科剪子、眼科镊子。3、5%CO2孵箱、PH计、95%氧气源。4、36电动恒温水浴。5、培养液、各种缓冲液及添加剂DMEM高糖培养基、Hank’s缓冲液 、20%胎牛血清，转换生长因子（TGF-β1）(5ng/mL)、胰岛素-转铁蛋白-硒（10ug/mL胰岛素，5ug/mL转铁蛋白，和0.5ng/mL亚硒酸盐）青霉素100U/Ml，链霉素100U/ml 。6、消化液 胶原

流式细胞术样本制备技术

切片 3~5 片，或者用乳钵研成 0.5 mm 直径大小的颗粒，放入 10 mL 的试管中； 加入 5~8 mL 二甲苯，室温下脱蜡 1~2 天，视石蜡脱净与否，更换 1~2 次二甲苯，石蜡脱净后，弃去二甲苯； 水化：依次加入 5 mL 的 100%、95%、70%、50% 梯度乙醇，每次 10 min； 去乙醇，加入蒸馏水 3~5 mL，10 min 后弃之； 消化：可加入 2 mL 的 0.5% 胰蛋白酶（pH1.5~2.0）消化液，置于37℃恒温水浴中消化 30 min，在此期间，每隔 10 min

写给细胞小白的实用手册

1 mL 消化液，在 37 ℃ 环境中进行消化，轻轻摇动培养瓶，经消化液铺满所有细胞表面。4. 观察：在倒置显微镜下待 1/2 细胞变圆后加适量完全培养液终止。或细胞层略有松动，肉眼可观察到「薄膜」现象时，倒掉消化液，再继续作用 2～3 分钟，轻轻摇动，细胞层可随残留的消化液呈片状从瓶壁上脱落下来，在显微镜下可发现细胞回缩变圆，细胞间隙增大，此时应立即终止消化。5. 终止：加入完全培养基 5 ml，用吸管反复吹打瓶壁上的细胞，确保所有瓶壁均吹打到，吹打时动作要轻柔，尽可能不要出现泡沫，以避免细胞的机械