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联硕生物
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文献和实验相关专题 一、原理:蛋白质与福林酚试剂反应,生成深蓝色复合物。蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。可用分光光度计 于500nm波长下进行测定。与标准曲线对照,而确定蛋白质含量。 二、试剂与材料 标准酪蛋白溶液(250ug/ml):酪蛋白预先用微量凯氏定氮法测定纯度,再称量制备。也可用250ug/ml牛血清蛋白 质标准溶液。 福林酚试剂:吸取试剂A(0.2M氢氧化钠与4%无水碳酸钠溶液等体积混合
清清蛋白或 g—球蛋白,溶于蒸馏水,浓度为250 mg/ml左右。牛血清清蛋白溶于水若混浊,可改用0.9 % NaCl溶液。2. 器材(1)可见光分光光度计(2)旋涡混合器(3)秒表(4)试管16支(三)操作方法 1. 标准曲线的测定:取16支大试管,1支作空白,3支留作未知样品,其余试管分成两组,分别加入0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升标准蛋白质溶液(浓度为250mg/ml)。用水补足到1.0毫升,然后每支试管加入5毫升试剂甲,在旋涡混合器上迅速混合,于室温(20~25℃)放置10
板液体每孔在 2ml 左右,不宜太多,或者太少。取两个 1.5mlEP 管,记为 A 管,B 管,每个 EP 管加入 250ul Opti-MEM I,然后 A 管加入 5-10ul lipofectamine 2000,B 管加入 100pM-200pM 的 siRNA(见买来的 siRNA 说明书),然后静置 5min,混合在一起,静置 20min,用 AB 混合液加入到 1.5ml 的无血清培养基 C 内,混匀; 将六孔板里的细胞的液体吸出,用 PBS 清洗两遍; 将 ABC 混合液 2ml
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