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文献和实验完整性分析。 二、基因组 DNA 的去除 某些情况下,痕量基因组 DNA(gDNA)可能与 RNA 共同被纯化。污染 gDNA 可能会干扰反转录结果,导致 RT-qPCR 等高灵敏度实验出现假阳性、高背景或检测率降低。 为去除 gDNA,通常在 RNA 分离过程中加入 DNase I。在进行 RT-(q)PCR 之前,必须完全去除 DNase I,因为任何残留的酶都会使单链 DNA(如引物和 cDNA)降解。通常,DNase I 失活(如,EDTA 和加热处理)或酶去除步骤会导致 RNA
孕酮的放射免疫测定法很敏感,但由于孕酮是半抗原,须先同牛血清白蛋白结合,才能注射于家兔,使之产生抗体。牛血清白蛋白结合在孕酮上的不完全部位对抗血清的特异性有很大关系,若结合在C3抗血清无特异性,结合在C6则特异性高,结合在Cll特异性更好。孕酮试剂盒已广泛应用于临床,介绍如下。 一、基本原理 此法采用双抗体放射免疫法: Ag※+Ab+Abl一(Ag※Abl)+(AgAbI)+Ag※ 含孕酮的病人标本
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR
反转录RNA ,以消除RNA 模板的二级结构。 4 .MMLV 反转录酶的RNase H- 突变体:商品名为SuperScript 和SuperScript Ⅱ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA 转换成cDNA ,这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA 模板合成较长cDNA 。 二、合成cDNA 引物的选择 1 . 随机六聚体引物:当特定mRNA 由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝
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