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鹿森生物
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500ml
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文献和实验;3. 用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提样品,1700×g,离心 10 min。如果样品溶解得不好,再加 1 体积不含蛋白酶 K 的消化缓冲液,重复离心。如果在界面上有一层厚的白色物质,重复抽提一次,将上层 (水溶液) 转移至一个新离心管中;4. 加入 1/2 体积 7.5mol/L 乙酸铵和 2 倍体积 100% 乙醇,12 000 rpm 离心 2 min;5. 用 70% 乙醇洗涤,晾干,沉淀用 TE 缓冲液或无菌双蒸水重新溶解, 使终浓度在约 1 mg/mL。注: 加入 0.1% 的 SDS 和 1? 滋
Eppendorf 管中,吸取500μl AW buffer 放入柱子中心,10000×g 离心1min (洗涤DNA ,除去盐分); (j)重复一次,吸取500μl AW buffer 放入柱子中心,10000×g离心2min (确保除去所有的缓冲液),在使用前2min 从温育中取出 AE buffer ; (k)将柱子放置于一新的2ml Eppendorf 管中,吸取100μl AE buffer 放入柱子中心,10000×g离心1min (洗脱DNA ); (l)重复(K)步骤一次; (m)将装有
Falcon管内并离心3分钟; 4.弃去上清并将细胞重悬于冷的冻存液中(10cm的培养皿用2ml,15cm的培养皿用6~7ml。) 5.分装于冻存管内,每管1ml; 6.置-80℃过夜,第二天移入液氮。 明胶包被 准备500ml 0.1%明胶溶液 1.将0.5g明胶溶解在500ml无钙镁的PBS中(50-65℃水浴15~30分钟)。 2.最好在溶液没有冷却的情况下通过0.2μm滤膜过滤,贮存在4℃。 包被培养板或培养皿 1.加入足量的明胶溶液覆盖培养平面(15cm培养
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