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RT
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99
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鹿森生物
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500ml
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文献和实验4 , 47.5 mg/L Na2 HPO4 , 调pH至7.2. HBSS一共分为四种,含钙镁,含酚红;含钙镁,不含酚红;不含钙镁,含酚红(D-Hanks );不含钙镁,不含酚红(D-Hanks)。此四种产品可根据客户需要自己选择。而如果客户无法判断应该选择哪一种,可以选不含钙镁,不含酚红(D-Hanks )。 Hanks’ 含钙镁 含酚红 Hanks’
所有剩余组织。计数和接种细胞,进行培养。 (2)胶原酶 (Collagenase) ●用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4 mm小片,用Hanks'平衡液(HBSS)清洗组织碎片几次。 ●加入胶原酶(50~200单位/ml,溶解在HBSS中)。 ●在37℃孵育4到18小时。加入3mM CaCl2增加解离效率。 ●通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液,以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。如果需要进一步的解聚,在碎片中加入新鲜的胶原酶。 ●通过离心在HBSS中清洗悬液几次
颗粒位于细胞表面和细胞之间。 ②荧光染色法:荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258,可使支原体内含有的DNA着色,染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下:首先将细胞接种盖玻片上,在细胞未长满前取出玻片,用不合酚红的Hanks液漂洗一下,用l: 3醋酸甲酵固定10Min,然后用生理盐水漂洗。置于用生理盐水配浓度为50pg/ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min。向细胞面滴加pH5.5磷酸缓冲液数滴,然后置荧光显微镜下观察。镜下支原
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