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99
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鹿森生物
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500ml
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文献和实验。 4、离心, 2000r/min , 15 ~ 20min ,使细胞成团。 5、小心吸去上清,加入 2.5 %戊二醛固定液固定细胞团,以免细胞团散开。 6、取出离心管内的琼脂,仔细切下尖槽内含有细胞团的琼脂块。 7、将含细胞的团琼脂块投入含戊二醛固定液的小瓶中, 4 ℃(可长期)保存。 8、用 0.1mol/L PBS 缓冲液洗 1 次。 9、1 %锇酸后固定 30 ~ 60min 。 三、荧光显微镜观察方法 (一)吖啶橙染色法 1、制备活细胞悬液,浓度约为 107 /ml
%乙醇中分色后再镜检。(二)方法二1. 取女性口腔上皮细胞涂片。待干燥。2. Carnoy固定液中固定15分钟。干燥。3. 5N HCl中10分钟。水洗。干燥。4. 0.2%甲苯胺兰染色2-5分钟。水洗。气干。5. 镜检。四、注意事项1. 涂片时应均匀涂成单层,取材细胞要多些。取材前应漱口。2. 镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的细胞观察,X-小体大小约为1μm,多位于细胞核边缘。3. 统计X-小体阳性率,计数应选300-500个细胞。五、试剂1. 硫堇染液配方:①4%硫堇原液:4g硫堇粉末置研钵中以
加入适量红细胞裂解液裂解红细胞(可加入 500 μL 1× 红细胞裂解液重悬细胞,室温裂解 2 min 后,立马加入 10 mL PBS,300 g 离心 5 min 后弃上清)。 若提取的腹腔巨噬细胞需培养,请注意无菌操作。 收集腹水时,从小鼠左侧(肠道较多)注射 PBS,从右侧(器脏较大)抽腹腔灌洗液,注意不要扎到器脏。 小鼠腹腔灌洗液收集细胞比较脆弱,加细胞染色缓冲液有利于细胞的保存,但建议当天及时检测。 小鼠腹腔灌洗液中大多数为巨噬细胞,巨噬细胞检测需要封闭Fc受体,此时可使用小鼠 CD16/32纯
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