3-(吡啶-3-基)-1H-1,2,4-三唑-5-胺 3-

已知基因序列的获取策略――兼谈引物设计与序列分析

引发DNA聚合反应(即错配)。 引物设计注意事项 -引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38bp。 -引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。 -引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。 -5’端序列的修饰与标记：可在引物设计时加上限制酶位点、核糖体结合位点、起始密码子、缺失或插入突变位点以及标记生物素、荧光素、地高辛等. 通常应在5‘端限制酶位点外再加1-3个保护碱基。 -简并引物：应

怎样选择合适的展开剂

点较“拖”)，最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。(选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。) 分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响。温度，湿度对分离效果影响也很明显，在实验中我们发现

有机合成中展开剂的选择

分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚―EtOAc―HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。（选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。）分离效果的好坏和所用硅胶