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北京百泰派克生物科技有限公司
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糖基化分析名词G0GF
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糖基化分析名词G0GF的解析与应用
在糖生物学研究中,G0GF作为一类核心糖链结构,其分析对于理解dànbáizhì功能调控、疾病标志物发现及生物药物开发具有重要意义。G0GF代表的是非岩藻糖基化的双天线复杂型N-糖链,其结构特征为末端缺少岩藻糖(Fucose)修饰,且两条分支均以半乳糖(Gal)终止(结构式:GlcNAc2Man3GlcNAc2Gal2)。这种糖型在IgG抗体的Fc区糖基化中尤为关键,其丰度变化直接影响抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)效应。通过质谱技术(如MALDI-TOF-MS或LC-ESI-MS/MS)结合糖苷酶酶解策略,可实现对G0GF的定性与定量分析。
G0GF的分析流程通常包括糖链释放、纯化、衍生化和检测四个步骤。首先,通过肽-N-糖苷酶F(PNGase F)将糖链从dànbáizhì上酶切释放,随后采用固相萃取(如石墨化碳柱)或亲水相互作用色谱(HILIC)富集糖链。为提升质谱灵敏度,常对游离糖链进行还原胺化标记(如2-AB或RapiFluor-MS衍生化试剂)。在液相色谱-质谱联用(LC-MS)分析中,G0GF可通过保留时间及质荷比(m/z)进行鉴定,其典型特征离子包括双电荷离子[M+2H]²⁺和单唾液酸化变体。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定,但技术核心在于高分辨率质谱仪器的选择与碎片离子解析算法优化。
在生物制药领域,G0GF的占比是单克隆抗体糖基化质控的重要参数。例如,治疗性抗体中G0GF水平的升高可增强FcγRIIIa受体的结合能力,从而提升ADCC活性。通过工程化细胞株(如CHO细胞)或培养基添加物(如锰离子、尿苷)可定向调控G0GF的合成路径。此外,在癌症研究中,血清IgG的G0GF水平与肝癌、类风湿关节炎等疾病的进展呈负相关,这为糖链作为诊断标志物提供了潜在依据。
常见问题:
Q1. G0GF与G0F糖型在功能上有何本质差异?
A:G0GF缺乏核心岩藻糖(与G0F相比),导致其与FcγRIIIa的亲和力显著提高。岩藻糖的缺失使抗体Fc区构象更开放,暴露出与受体结合的关键表位,ADCC活性可增强10-100倍。
Q2. 如何区分质谱检测中的G0GF与同分异构体G1GF?
A:需结合二级质谱的碎片离子分析。G0GF(Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2)会产生m/z 365(Hex-HexNAc)和m/z 528(Hex-HexNAc-Hex)的特征碎片,而G1GF因存在一个未半乳糖化的分支,会额外出现m/z 204(GlcNAc⁺)的强信号。
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文献和实验残基的出现比例。结果表明,改变补料批次条件对糖基化指数影响很小。大多数重链聚糖谱在不同的渗透压下相对稳定,尤其是对于 C56 细胞培养物中产生的 MAb。结果与文献中描述的重链抗体糖基化的性质兼容,即大量的非半乳糖基化岩藻糖基化聚糖结构(G0F),然后是具有一个(G1F)或两个(G2F)半乳糖残基的岩藻糖基化结构,具有有限的高甘露糖结构和唾液酸化的缺乏。总的来说,聚糖谱显示在高渗条件补料批次操作下基本上不影响 MAb 产物的糖基化。表 1 使用 HPLC 分析从 MAb 重链释放的聚糖注
)、干细胞生长因子(SCF)、血小板生成素 (TPO)等。 5、趋化因子(chemokine) 主要功能是招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入特定的淋巴器官和组织以及感染发生的部位。根据趋化因子近N端半胱氨酸(Cys)的位置、排列方式和数量,可分为CC、CXC、C、CX3C四个亚家族。 6生长因子(growth factor,GF) 生长因子(GF)是具有刺激细胞生长作用的细胞因子。 五、细胞因子的生物学活性 1.介导自然免疫、参与抗肿瘤和抗感染 2.调节T、B
多肽,彼此间可能存在的作用情况已进行了分析,从中发现了9百多种可能的相互作用,涉及到1000多个蛋白质。科学家为这一类型的研究专门发明了一个新的名词——“相互作用组”(interactomes)。 相互作用组研究可以分为两类。第一类是研究蛋白质相互作用的网络。细胞内的许多活动如信号转导等,都是通过一个复杂而广泛的蛋白质相互作用网络实现的。相互作用组的另一类研究是蛋白质复合体组成的分析。蛋白质复合体通常可以分为两种。一种是结构型的蛋白质复合体,如核孔复合体,这一类通常比较稳定?鸦另一种则是功能
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