脂肪外泌体提取

脂肪外泌体提取技术研究进展

外泌体是直径30-150 nm的细胞外囊泡，由多种细胞分泌，携带dànbáizhì、核酸和脂质等生物活性分子，参与细胞间通讯和生理调控。脂肪组织作为重要的内分泌器官，其分泌的外泌体在代谢调控、免疫调节和组织再生等领域具有重要研究价值。脂肪外泌体提取是获取这些功能性囊泡的关键步骤，其技术路线直接影响下游分析的可靠性和重复性。目前主流方法基于差速离心技术，通过逐步去除细胞碎片、凋亡小体和脂蛋白等干扰物，zuì终获得高纯度外泌体。超速离心法仍是金标准，但新兴的尺寸排阻色谱、聚合物沉淀和免疫亲和捕获等技术在特定场景展现出dútè优势。

脂肪外泌体提取面临的主要挑战源于脂肪组织的特殊性。脂肪细胞富含脂滴，在裂解过程中易释放大量脂蛋白颗粒（如LDL和乳糜微粒），其密度与外泌体重叠（1.13-1.19 g/mL），传统超速离心难以wánquán分离。针对这一问题，研究者开发了密度梯度离心优化方案，采用碘克沙醇或蔗糖连续梯度，将外泌体分离区间jīngquè控制在1.15-1.17 g/mL。此外，脂肪组织中含有高浓度胶原纤维，需通过Ⅱ型胶原酶消化（通常0.2%浓度，37℃振荡1小时）预处理，但酶解时间过长可能导致外泌体膜蛋白降解。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。

近年来，基于微流控的脂肪外泌体提取技术崭露头角。例如，集成确定性侧向位移（DLD）芯片可通过设计微柱阵列实现粒径选择性分选，对100 nm左右囊泡的捕获效率可达90%以上。与超离法相比，该方法操作时间缩短80%，且能避免高速离心导致的囊泡聚集。值得注意的是，无论采用何种方法，提取后的外泌体均需通过Western blot检测CD9/CD63/CD81等标志蛋白，并配合纳米颗粒追踪分析（NTA）或透射电镜进行表征。

对于临床样本（如吸脂手术获取的脂肪组织），前处理环节尤为关键。建议采用PBS充分洗涤去除血源性外泌体干扰，并通过0.22 μm滤器预过滤消除纤维蛋白凝块。有研究表明，肥胖患者脂肪外泌体的miRNA载量与BMI呈负相关，这要求提取过程需严格标准化以避免批次差异。在存储方面，提取的脂肪外泌体建议分装后保存于-80℃，避免反复冻融导致膜完整性破坏。

常见问题：

Q1. 脂肪外泌体提取中如何有效去除脂蛋白污染？

A：可采用组合策略：首先通过超速离心（100,000×g 2小时）初步富集，再使用密度梯度离心（如OptiPrep梯度）精细分离。验证阶段建议检测ApoB-100等脂蛋白标志物，必要时可联合使用肝素沉淀法选择性去除LDL。

Q2. 小型脂肪活检样本（<1g）的外泌体提取有何优化方案？

A：推荐采用基于TiO2纳米线的固相萃取技术，其结合pH值调控的磷酸化亲和原理，能从微量样本中高效捕获外泌体（回收率>70%）。配套使用qEV尺寸排阻柱可进一步降低样本损失，该方法已在小鼠腹股沟脂肪垫实验中验证有效。