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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
现货
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
25ml/片 1片/25ml/片 10片
| 规格: | 25ml/片 1片 | 产品价格: | ¥80.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 25ml/片 10片 | 产品价格: | ¥700.0 |
产品简介
细胞裂解后的蛋白粗提物中含有大量的内源性蛋白磷酸酶,这些酶可以通过各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化。因此为了防止蛋白纯化过程中目的蛋白不受蛋白磷酸酶的破坏,需要加入磷酸酶抑制剂对其进行活性抑制。
本磷酸酶抑制剂Cocktail混合物包含6种独立的蛋白磷酸酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白磷酸酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白磷酸酶活性,包括蛋白丝/苏氨酸磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。此抑制剂混合物适用于从各类组织和细胞中提取蛋白,直接加入蛋白裂解液中,均能有效抑制磷酸化蛋白质的去磷酸化,维护蛋白质的磷酸化状态。适用于Western Blot和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等。
产品特点
1. 便捷性—只需将速溶片从简易包装取出并加入缓冲液中即可。
2. 完善的保护性—保护磷酸化蛋白质免受广泛的磷酸酶的去磷酸化作用。
3. 稳定性—加入片剂的裂解液或单独制备的储备液可在2-8℃保存1个月,-20℃可保存6个月。
4. 安全性—本产品为没有任何风险的无毒抑制剂。
产品有效成份
|
磷酸酶抑制剂 |
目标磷酸酶 |
|
Cyclosporin A |
PP2B、PP2C |
|
Sodium Fluoride |
酸性磷酸酶 |
|
beta-Glycerophosphoric Acid Disodium Salt |
蛋白丝/苏氨酸磷酸酶 |
|
Sodium Orthovanadate |
蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷酸酶 |
|
Disodium Molybdate Dihydrate |
酸性磷酸酶 |
|
Sodium Pyrophosphate, decahydrate |
PP1、PP2A |
使用方法
1. 将一片试剂直接加入25 mL裂解液中,也可加入蒸馏水、PBS等缓冲液制备高浓度储备液。
2. 溶解1 min,漩涡混匀即可。
注:充分溶解后的溶液可能呈现微弱的浑浊,此现象正常。
保存条件
4℃保存,有效期一年。
注意事项
1. 本品具有广谱的蛋白磷酸酶抑制活性,但是不具有蛋白酶抑制剂活性。若需要保护蛋白不被水解降解,可搭配使用我司的蛋白酶抑制剂。
2. 该磷酸酶抑制剂片剂在室温放置过久可能会引起变色。
3. 本品可制备25 mL 1×磷酸酶抑制剂,对某些含有高浓度磷酸酶的样本可能需提高终浓度到2×或3×。
4. 避免皮肤或黏膜与试剂接触。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶,标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
化状态进行有效保护。无数经验和实验证据表明:使用 western blot 检测磷酸化蛋白时,一定要在细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂,还要加入一定量的磷酸酶抑制剂,否则即使出来条带也会很浅,给后继定量分析造成困难。磷酸酶抑制剂可以自己配制,也有商品化的 cocktail 可直接购买。像 erk1/2 的磷酸化有 THR 磷酸化和 tyr 磷酸化,所以要有 ser/thr 磷酸酶抑制剂和 tyr 磷酸酶的抑制剂。一般自己配制略显麻烦,考虑的因素比较多,效果不一定好,很多商品化的 cocktail 操作
signaling公司的Phospho-PI3K p85 (Tyr458)/p55(Tyr199) 我自己分析没有条带无非是细胞状态不好,或者抗体不好,不知道还有没有可能是没有加磷酸化酶抑制剂,以至于磷酸化的蛋白被去磷酸化了? 谢谢啦~ yhwangcams 检测内参蛋白如GAPDH,ACTIN,TUBULIN是否成功? 用PLB裂解细胞得到的蛋白适合做REPORTER,做WESTERN不太合适。建议可以用其他BUFFER裂解蛋白。
浓度的样品,在处理过程中都一定要严格按照设计的时间来孵育和终止,尤其是对于磷酸化蛋白,哪怕 1 秒也不要提前或耽搁。 2. 抑制蛋白降解 这是样品制备中最需要注意的部分。抑制样品蛋白降解的方法主要有两种: (1) 使用蛋白酶抑制剂 小编使用的是罗氏公司(Roche)的蛋白酶抑制剂 Cocktail 片剂,效果不错。再与 PMSF 共同使用,可以很好地抑制蛋白降解。 (2) 全程低温操作 提前预冷 PBS、裂解液甚至枪头等,从收集细胞开始一直到煮样的全过程都应该
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