- ￥280
- 经科
- JK-530
- 国产
- 2025年12月05日
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![LLC [LL/2; LLC1]细胞专用培养基](https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0415/250/2557291961346189771.jpg!wh200)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100ml
产品简介
Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH7.5),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
使用说明
对于培养细胞样品
1、融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2、对于贴壁细胞：去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(若血清中的蛋白没有干扰,可不洗)。按照6孔板每孔加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
3、充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加100ul裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150或200ul。
对于组织样品
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3、按照每20mg组织加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5、充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
保存条件
-20℃保存,一年有效。
注意事项
1、为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备PMSF。
3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
4、可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶，标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
Cell Lysis/Western/IPSteven Finkbeiner,Departments of Neurology and Physiology,UCSFcompiled by 6/95 by AJS from AB)Fresh 1X LysisFresh 1X LysisFinal5ml10ml2X Lysis 2.5 ml5mlNaCl0.25M0.25ml of 5M0.5 ml of 5MNa3VO40.1mM25l (μl) of 200 mM5l (μl) of 200
其他方法验证更详细的相互作用信息。 图 11：使用抗体进行 Co-IP 与使用 Strep-Tactin®XT 进行pull-down 融合蛋白沉降 pull-down IP 和 Co-IP 通过固定抗体来捕获诱饵蛋白质及其结合分子，而 pull-down 可使用带亲和标签的目的蛋白进行，在体外验证蛋白间的直接相互作用。Pull-down 是通过磁珠/琼脂糖填料固定带有标记的「诱饵」蛋白，从细胞裂解液、纯化蛋白或表达系统中捕获「猎物」蛋白，然后将复合物蛋白分离后进行凝胶或质谱分析，从而确认互作
或者互作蛋白复合物（红色+黄色）洗脱 Step 5：分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验，先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白（IP）或者互作蛋白对（co-IP，比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y），即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照：用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了，固然是值得高兴
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