DNA pull-down Kit（植物）

实验原理

DNA pull down 技术是体外研究DNA与蛋白质互作的有力工具。该技术针对目标区域设计特异性DNA探针并经过脱硫生物素标记,标记后探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和结合,再与总蛋白提取物进行孵育，有互作的蛋白质可以和DNA探针特异性结合,形成磁珠-DNA探针-蛋白复合物,洗涤去除非特异性结合的蛋白质,再经过洗脱得到目的DNA探针-蛋白质复合物,最后通过Western Blot或质谱(MS)鉴定蛋白质类型。其原理图如1.1:

产品优势

• 高灵敏度与特异性：

• 采用高亲和力固相载体-链霉亲和素磁珠，优化实验体系，显著降低非特异性结合，适配低丰度样本。

• 多维度下游分析兼容性:

• 洗脱蛋白可直接用于质谱（MS）、Western Blot（WB）或银染，满足定性/定量分析需求。

应用范围

• 研究转录因子（TFs）与DNA的相互作用，定位调控元件（如启动子、增强子）的结合蛋白。

• 解析表观遗传调控（如DNA甲基化、组蛋白修饰）对蛋白-DNA结合的影响。

实验流程

试剂盒组分

常见问题与解答

Q:通过pull-down后银染验证发现，没有想要的目的条带?

1)有可能是样品被蛋白酶降解，对应的策略是需要添加蛋白酶抑制剂，所有操作保持 4℃以下冰上操作并防止冻融；

2)有可能是加入生物素标记DNA量不足，可以增加生物素标记DNA量；

3)裂解液盐碱度太高，需用低盐碱度的裂解液；

4)加入细胞裂解液不够，可以增加细胞裂解量。