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Elispot（酶联免疫斑点检测）是一种高灵敏度的技术，用以检测单个细胞分泌的细胞因子或其它生物分子。Elispot技术作为疫苗研究免疫原性验证的金标准，其中单核免疫细胞的质量对实验结果起着决定性的作用。因此单核免疫细胞的制备流程中一些可能影响细胞活率和功能的细节需要特别注意。
一、样本类型
目前常见的样本类型包括人的外周血单核细胞（PBMC）、动物脾脏提取单核细胞以及肿瘤浸润淋巴细胞等。Elispot实验对于细胞的活率要求较高，通常在90%以上的活率，能保证准确的结果，有些样本受限不能拿到高活率的，则可将细胞活率降至80%。我司对于人外周血以及小鼠脾脏组织提取单核细胞实测数据如下：
表1:不同样本类型的细胞活率比较
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文献和实验相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 图注：ELISPOT 法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生IFN- 的T细胞与一百万个抗原 呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和ELISA 法（下图）分别测量产生IFN- 的细胞的数目。 1、ELISPOT 分析使单细胞分泌产物可视
我们在设计pcr引物的时候，经常需要将设计好的正反向引物与基因组DNA序列进行比对验证，但是因为反向引物是反向互补的，所以有些麻烦。因此，在这里介绍两个非常的小工具，一个是在线的模拟PCR，一个是本地运行的程序包，我会以附件形式上传，不需要丁当即可下载。两个都写得非常详细，相信大家都能看懂。不知道这个帖子能不能加分？希望版主看到后给予加分奖励 方法一：UCSC中的In-Silico PCR 1、登录UCSC，网址链接http://www.genome.ucsc.edu/index.html
liuwenbinahslyy 基因芯片数据分析时，比值大于2.0或者小于0.5被认为是有表达差异，为什么要相差两倍呢？这个比值与PCR或Western blot验证时的基因或蛋白表达差异是否是一致的(即是否也是相差两倍以上)？按理说PCR或Western blot检测表达差异根本不需要相差两倍以上，这还取决于重复实验的次数及数据的分布情况。 zjubell liuwenbinahslyy wrote
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