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文献和实验底增加稳定性; 矩形:斜颈的矩形培养瓶瓶底至瓶颈是一个坡度设计,易于倾注,移液管或者细胞刮容易进入瓶体,大部分斜颈瓶都有一个裙边以增加稳定性。直颈和角度颈的矩形培养瓶整个瓶底都是培养面,节省空间并减少培养基因晃动而流到瓶盖。 以下是搜集的不同形状和用途的 细胞培养 瓶,主要包括:Nunc细胞培养瓶、Celstir夹套双侧臂细胞培养瓶、CellLine细胞培养瓶、Wheaton大容量细胞培养套装、美国 BELLCO 细胞悬浮培养瓶系列、美国 BELLCO
以及饱和湿度条件下松盖培养,每 2~3 d 换液一次,当细胞长至 80% 铺满时再消化传代。实验分组H1299 细胞-Con 组lv-shCON 转染的 H1299 细胞lv-shIFITM3 转染的 H1299 细胞Annexin V-FITC/PI 检测用去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer;细胞收集:悬浮细胞收集:离心 5 分钟;贴壁细胞:用不含 EDTA 的胰酶消化收集后(注:胰酶消化的时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸
液裂解细胞,用移液器适当吹打使细胞脱落,大瓶贴壁细胞可以先用胰酶洗脱下来后再裂解,裂解方法仿照悬浮细胞处理。 B、 悬浮细胞的处理:先将悬浮细胞置于 EP 管中 3000 rpm 离心 5 min 去掉上清培养基,每 20 μL 体系细胞加 100 μL 裂解液反复吹打至细胞完全破碎。 处理好的样品 12000 rpm 离心 5 min,取上清即为提取的蛋白。置于 4 ℃ 可保存一周,-20℃ 可保存约 2 个月,-80 ℃ 可保存半年。 蛋白浓度的测定:酶标板,酶标仪、离心机、1 mg/mL
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