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文献和实验细胞上清外泌体细胞上清外泌体提取图解过程 1.核对样本 2.离心,3000g,15min; 3.离心后样本(有略微沉淀) 4.将样本转移至新的 50ml 管并加 ECS 试剂; ECS 与试剂有明显分层; 震荡混匀; 5.在 4 度冰箱静置 2H 以上,离心 10000g,60min; 6.离心后的样本(沉淀明显,沉淀中富含外泌体) 将上清吸出留下沉淀,将离心管倒扣于纸上自然晾干残留的上清液; 7.加 PBS 重悬沉淀; 用 PBS 洗脱后的沉淀 8.离心进一步去除
基本原理 活细胞(密度较小)和死细胞(密度较大)密度不同,从而有助于将活的淋巴细胞和红细胞分离。 附加材料 高密度溶液:Ficoll-Paque(Ficoll和泛影酸钠;Pharmacia LKB)或Lympholyte-M(Cedarlane) 12ml或50ml聚丙烯离心管(比聚苯乙烯离心管好) 注: Ficoll-Paque和Lympholyte-M的密度与温度有关;该方法中所采用的以及其他商品化的高密度溶液适合在室温中使用。因此应注意使细胞悬液、离心和高密
质亚基带上大量负电荷,掩盖了蛋白质各种亚基间原有的电荷差异。亚基的构象均呈长椭圆棒状,各种蛋白质亚基-SDS复合物表现出相等的电荷密度。在电场中其迁移速率仅与亚基分子质量有关,因此,SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳可以进行蛋白质亚基分离,并用来测量蛋白质亚基的分子质量。三、仪器、试剂和材料1.仪器( 1)稳压稳流电泳仪( 2)垂直板电泳槽( 3)微量注射器( 4)烧杯50ml X2( 5)白瓷盘( 6)脱色摇床( 7)吸管0.5ml X 2 ,5mlx2,10mlx3( 8)真空泵( 9)台式高速
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