[Genview细胞培养] 重组胰蛋白酶消化液ReTeyp-

细胞培养从头学——入门篇

细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 （五）继续培养 用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。 传代细胞培养注意事项： 1.严格的无菌操作 2.适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该

细胞培养大攻略

或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液浓度为：   （1）0.05%胰蛋白酶+0.02% EDTA；   （2）0.25%胰蛋白酶+0.03% EDTA； （3）0.25% 胰蛋白酶   溶液pH8.0-9.0；使用D-Hank液配制。   多数细胞传代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02% EDTA这种消化液。 80、培养基在使用过程中应注意

细胞培养的操作步骤

，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。 三、体内细胞培养及其操作步骤 1． 瘤细胞悬液接种 （1）无菌选取生长良好(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。 （2）在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经80～100目筛网过滤成细胞悬液。 （3）培养细胞应用PBS洗两遍。 （4）计数并调整细胞浓度至107～108／ml。 （5）常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.1ml／部位，＞