蛋白含量检测的经典方法

蛋白含量检测的经典方法及其应用

 

蛋白含量检测是生物化学、分子生物学及临床诊断等领域的基础实验技术，其准确性直接影响下游实验结果的可靠性。目前，蛋白含量检测的经典方法主要包括Bradford法、Lowry法、BCA法（二kuílín甲酸法）以及紫外吸收法（A280法）。这些方法各具特点，适用于不同实验场景，研究者需根据样品特性、灵敏度需求及干扰因素选择合适的检测手段。

 

Bradford法基于考马斯亮蓝G-250染料与dànbáizhì结合后的吸光度变化，在酸性条件下，染料的zuì大吸收峰从465 nm红移至595 nm，吸光值与蛋白浓度呈正相关。该方法操作简便、快速（约5-10分钟），且对去垢剂（如SDS）耐受性较强，但易受高浓度变性剂（如尿素）或碱性缓冲液干扰。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。Lowry法则通过铜离子还原（双缩脲反应）与Folin-酚试剂的协同作用检测蛋白，灵敏度高于Bradford法（检测下限约1-5 μg/mL），但步骤繁琐且受还原剂（如DTT）、糖类或Tris缓冲液的影响显著。

 

BCA法结合了Lowry法的铜还原原理与BCA螯合剂，形成紫色复合物，在562 nm处检测吸光度。其优势在于对去垢剂和还原剂的耐受性优于Lowry法，且线性范围更宽（0.2-50 μg/mL），但高温孵育（37-60℃）可能影响热不稳定蛋白的测定。紫外吸收法（A280）则直接利用dànbáizhì中sèānsuān和làoānsuān的紫外吸收特性，适用于纯化后的蛋白溶液，无需额外试剂，但核酸污染（A260吸收）或高浓度缓冲液可能干扰结果。

 

此外，凯氏定氮法作为传统方法，通过测定样品总氮量推算蛋白含量，虽准确性高，但耗时较长且需zhuānyè设备，多用于食品工业而非实验室常规检测。近年来，荧光染料法（如NanoOrange）因超高灵敏度（ng级）逐渐应用于微量蛋白检测，但成本较高。

 

常见问题：

 

Q1. 如何选择适合复杂样品（如细胞裂解液）的蛋白含量检测方法？

A：细胞裂解液常含去垢剂、还原剂及核酸，推荐BCA法或改良型Bradford法（如添加SDS兼容试剂）。BCA法对还原剂耐受性较好，而Bradford法的快速性适合高通量筛选。若存在严重核酸污染，可结合A280/A260比值校正或采用核酸酶预处理。

 

Q2. 高浓度尿素或盐酸胍是否会影响蛋白含量检测结果？

A：尿素和盐酸胍会干扰Bradford法（导致染料沉淀）和Lowry法（抑制铜还原反应）。此时建议使用BCA法（适当延长孵育时间）或紫外吸收法（需注意变性剂在280 nm处的本底吸收）。亦可稀释样品至变性剂浓度低于1 M以降低干扰。