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文献和实验HEK293 细胞家族怎么选?293、293T、293F、Expi293F 等常见亚型区别与应用场景
虑 AAV-293、293A 或经过验证适合 AAV 包装的 293 衍生株。 重组蛋白表达:小规模验证可用 293T,大规模表达可考虑 FreeStyle 293-F 或 Expi293F。 结构生物学或糖基化研究:可关注 HEK293S 及其糖基化相关衍生株。 实验中需要注意什么? HEK293 细胞的实验表现不仅取决于细胞亚型,也与细胞传代次数、细胞密度、培养基体系、转染试剂、质粒质量和培养条件密切相关。即使选择了合适的细胞株,如果细胞状态不佳,也可能出现转染效率下降、病毒滴度降低或蛋白
体,后续培养后收集的细胞上清中的外泌体不确定是从细胞分泌的还是血清中来的,影响结果的准确性。 2. 营养:细胞培养是需要一定的营养的,那么如果不加血清,单独只用基础培养基,就会导致细胞处于饥饿状态,严重影响细胞生长,甚至出现吞噬外泌体的现象,影响实验结果。 3. 杂蛋白:去外泌体胎牛血清可以很好地解决 1、2 中涉及的问题,但还会存在杂蛋白影响蛋白定量结果,导致数据偏高,影响后续实验的准确性。如果使用外泌体专用无血清培养基(专门针对外泌体获取的培养基,化学成分明确,类似于完全培养基的一种
首先,从细胞的培养过程下手。外泌体来自细胞,因此必须先从源头抓起。大部分的细胞培养过程中都是带有血清的,无论是牛血清、马血清等都是含有异源外泌体的,而我们研究的目标通常是细胞所分泌的外泌体,因此需要尽可能的去除这些异源外泌体的干扰。那么我们需要怎么做呢? 这里需要了解一个大原则:在细胞正常生长的条件下,尽可能的减少血清外泌体或者不使用血清。方法一,可以通过超速离心的方法去除血清中外泌体。方法二,通过外泌体专用无血清培养基来替代完全培养基,维持细胞
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