ID3560 ROS荧光探针-DHE 染料/探针 索莱宝

DHE是一种最常用的细胞膜渗透性的超氧化物阴离子（O2-）荧光检测探针。可以直接用于活细胞的氧化活性检测，包括ROS（活性氧）和超氧化物的检测。

DHE进入活细胞后，在超氧化物阴离子作用下脱氢，氧化生成Ethidium。Ethidium可以和DNA结合，产生红色荧光。当细胞内的超氧化物阴离子水平较高时，产生的乙锭较多，红色荧光就较强，反之则较弱。DHE本身呈蓝色荧光（λEx /λEm：355 / 420nm），直至被氧化为Ethidium，然后嵌入DNA内，使细胞核呈明亮的红色荧光（λEx /λEm：518/605 nm），可用荧光显微镜和流式细胞仪等仪器检测。

DHE是一种可渗透细胞的蓝色荧光探针，是过氧化物指示剂，可用于检测细胞内 superoxide radical anion，能有效地检测活性氧类。这种染料可以自由地进入细胞中，脱氢后成为Ethidium。DHE可以直接用于活细胞的标记。DHE被活细胞摄入后，可以在细胞内的超氧化物阴离子作用下脱氢，产生Ethidium。Ethidium可以和RNA或DNA结合产生红色荧光。当细胞内的超氧化物阴离子水平较高时，产生的Ethidium较多，红色荧光就较强，反之则较弱。DHE本身为蓝色荧光，最大激发波长为370nm，最大发射波长为420nm，脱氢后和RNA或DNA 结合产生红色荧光，最大激发波长为300nm，最大发射波长为610nm，实际观察时也可以使用535nm作为激发波长。

一般的，用于细胞内超氧化物阴离子检测时，DHE的常用浓度为1-10μM。

操作方法（仅供参考）

染色方法： 

（1）探针溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度，以此染色液更换细胞培养液或灌流液； 也可直接向细胞孵育液或灌流液中加入探针至所需浓度。 

（2）依据细胞ROS含量的不同，DHE终浓度可选择在1 μM~100 μM的范围，孵育时间可选择10~90 min。孵育可在 37℃或室温进行，要求避光。 

（3）孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞或组织。 

荧光显微镜： 

（1）对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观 察；对悬浮生长细胞，取25-50 μL细胞悬液滴到一张显微载 玻片上，再盖上一张盖玻片。 

（2）荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，ROS阳性细胞在整个核区被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的DHE可发出蓝色荧光。 

流式细胞仪： 

（1）对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 mL冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。 

（2）采用 480~535 nm 波长激发，测定 590 nm~610 nm 以 上的发射，细胞应可分成两个亚群：ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS 阳性细胞有较强的红色荧光。

注意事项

1. DHE在光照和空气中易被氧化，注意避光保存。

2. 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度， 以观察 ROS 的变化。

使用本产品的案例（仅供参考）

ROS 检测（生菜幼苗根尖；10 mM DHE, 25°C, 10min, 避光； Ex/Em: 488/510 nm）

ROS production in root tips of the treated lettuce seedlings was estimated by staining with DHE (Solarbio, Beijing, China) according to Yamamoto et al. Lettuce roots were soaked in the dye solution (DHE, 10 mM; acetone, 0.01%; CaCl2, 100 mM; pH 4.75) with gentle shake for 10 min at 25°C in 

the dark. After washing with 100 mM CaCl2 for 20 min, the fluorescence was observed and photographed using a fluorescence microscope with excitation 488 nm and emission > 510 nm. At least 15 roots per treatment were analyzed and the representative results were shown in the figures.

来源文献：Yan ZQ, Tan J, Guo K, Yao LG. Phytotoxic mechanism of allelochemical liquiritin on root growth of lettuce seedlings. Plant Signal Behav. 2020 Oct 2;15(10):1795581. doi: 10.1080/15592324.2020.1795581. Epub 2020 Jul 21. PMID: 32693669; PMCID: PMC8550531.

ROS Measurement（苍蝇的肠道（60 mM DHE，15 min，25 °C）；大脑（60 mM DHE ，25 min，25 °C ）； 避光）

For DHE staining, flies were anesthetized with CO2 and dissected in cold PBS under a dissecting microscope.    In ROS staining assay, 30 guts and 8 brains were assayed.    The dissected brains and guts were incubated at 25 °C with 60 mM DHE for 25 and 15 min, respectively.    Next, we washed the samples for 3 × 5 min in PBS at room temperature.    Before mounting, the samples were incubated at 25 ?C with 4’,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) for 10 min and then washed three times for 5 min with PBS at room temperature.    All steps were performed on a shaker in the dark.

来源文献：Wei JJ, Li XJ, Liu W, Chai XJ, Zhu XY, Sun PH, Liu F, Zhao YK, Huang JL, Liu YF, Zhao ST. Eucommia Polysaccharides Ameliorate Aging-Associated Gut Dysbiosis: A Potential Mechanism for Life Extension in Drosophila. Int J Mol Sci. 2023 Mar 20;24(6):5881. doi: 10.3390/ijms24065881. PMID: 36982954; PMCID: PMC10054339.

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标题:Preparation of Apoptotic Extracellular Vesicles from Adipose Tissue and Their Efficacy in Promoting High-Quality Skin Wound Healing

成员:Sun Hu-Nan, Ren Chen-Xi, Lee Dong Hun, Wang Wei-Hao, Guo Xiao-Yu, Hao Ying-Ying, Wang Xiao-Ming, Zhang Hui-Na, Xiao Wan-Qiu, Li Nan, Cong Jie, Han Ying-Hao, Kwon Taeho

论文因子:8.3 发表期刊:CELLULAR & MOLECULAR BIOLOGY LETTERS pmid:37268886

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标题:Baicalein Attenuates Neuroinflammation in LPS-Treated BV-2 Cells by Inhibiting Glycolysis via STAT3/c-Myc Pathway

成员:Xue Dong, Dandan Li, Zhiyao Fang, Chenyang Zhang, Jia Wang, Xianyao Wan

论文因子:6.1 发表期刊:Food & Function pmid:37326488

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标题:Dusp1 regulates thermal tolerance limits in zebrafish by maintaining mitochondrial integrity

成员:Wang Y; Wang HM; Zhou Y; Hu LH; Wan JM; Yang JH; N

论文因子:4.9 发表期刊:Zoological Research pmid:36419379

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标题:The role of transient receptor potential ankyrin 1 in age-related endothelial dysfunction

成员:Yang Y. Wang D. Wan J. Ran F. Yang L. Chen S. Wang

论文因子:3.746 发表期刊:Exp Gerontol pmid:34419618

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标题:Tom70 protects against diabetic cardiomyopathy through its antioxidant and antiapoptotic properties

成员:Wang P. Wang D. Yang Y. Hou J. Wan J. Ran F. Dai X

论文因子:3.083 发表期刊:Hypertens Res pmid:32724135

基本信息
CAS	No.104821-25-2
中文名称	ROS荧光探针-DHE
英文名称	Dihydroethidium
别名	二氢乙锭;9-Hydroxyrisperidone;PD-MY 003
分子式	C21H21N3
分子量	315.41
溶解性	Soluble in DMSO
纯度	≥98%
外观(性状)	Solid
储存条件	Powder:2-8℃，2 years;Insolvent(母液):-20℃，6 months;-80℃，1 year
MDL	MFCD00077335
SMILES	CCN1C(C2=C(C=CC(=C2)N)C3=C1C=C(C=C3)N)C4=CC=CC=C4
InChIKey	XYJODUBPWNZLML-UHFFFAOYSA-N
InChI	InChI=1S/C21H21N3/c1-2-24-20-13-16(23)9-11-18(20)17-10-8-15(22)12-19(17)21(24)14-6-4-3-5-7-14/h3-13，21H，2，22-23H2，1H3
PubChem CID	128682
背景说明	是一种可渗透细胞的蓝色荧光探针，是过氧化物指示剂，可用于检测细胞内 superoxide radical anion。
单位	瓶