- ￥1955
- 经科
- JK-057
- 国产
- 2025年12月10日
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- 文献和实验
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现货
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
4℃
- 规格：
1ml
产品介绍
本公司生产的mRNA专用转染试剂是一款高性能的mRNA专用转染试剂， 可用于mRNA在多种贴壁细胞中的传送。可直接将mRNA传递到细胞质中进行表达，避免了转录调控作用及进入细胞核的限制。可被应用在短期蛋白表达的相关研究工作中。
应用范围
该转染试剂可适用于众多贴壁或悬浮细胞株的mRNA转染。在各种常规、难转、原代细胞及干细胞中均可得到较高的转染效率，且性能稳定。与其它转染试剂相比，具有不受血清影响、毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。
使用方法
mRNA的转染
以24孔板为例，请参考下表的转染规模调整，步骤如下:
1、细胞接种: 每孔接种0.5-1.0×105个细胞，细胞培养12-24小时，使转染时细胞密度达到60-70%融合度。
2、mRNA稀释: 将0.5µg的mRNA加入Opti-MEM培养基中，稀释后的终体积为10µL。
3、转染试剂稀释: 取1μL的转染试剂加入到9μL的Opti-MEM培养基中，稀释后的终体积为10µL。
4、复合物制备：将上述mRNA稀释液和转染试剂稀释液混合，轻轻吹打均匀后，室温静置10分钟。
5、将上述20µL复合物加入到24孔板中，轻轻吹打混匀，继续培养18-48小时后检测转染效率，无需更换
培养基。
mRNA的转染优化
可通过改变细胞密度、mRNA浓度以及转染试剂浓度对转染进行优化。保证细胞融合度在60%以上，转染试剂 (µL):mRNA (µg)可以在1:1和5:1之间调整。
不同培养板所需转染试剂和mRNA的用量
|
培养板 |
单孔面积 |
接种培养基 |
Opti-MEM稀释后终体积 |
mRNA转染 |
|
|
试剂用量 |
mRNA |
||||
|
96孔板 |
0.3cm2 |
200µL |
10µL |
0.4µL |
0.2µg |
|
24孔板 |
2cm2 |
500µL |
20µL |
1µL |
0.5µg |
|
12孔板 |
4cm2 |
1mL |
40µL |
2µL |
1µg |
|
6孔板 |
10cm2 |
2mL |
100µL |
4µL |
2µg |
|
60mm培养皿 |
20cm2 |
5mL |
200µL |
8µL |
4µg |
|
100mm培养皿 |
60cm2 |
15mL |
600µL |
24µL |
12µg |
运输保存
常温运输，2-8℃可保存一年。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶，标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
mRNA 区域设计 siRNA。 2.选择 GC 含量低的 siRNA 研究人员发现 G/ C 含量 40–55％ 的 siRNA 活性比 G/ C 含量高于 55％ 的高。 3.纯化体外转录的 siRNA 确保所有用于转染的 siRNA 大小和纯度。为了实现最高级别的纯度，我们建议使用玻璃纤维过滤器结合和洗脱，或用凝胶纯化。所用的凝胶为 15- 20％ 的丙烯酰胺凝胶，以除去反应体系中多余的核苷酸、短低聚物、蛋白质和盐。注意：化学合成的 RNA 通常需要通过凝胶电泳进行纯化。 4.谨防RNA
选择是RNAi实验成败的关键。哺乳动物细胞RNAi实验中，使用最广泛且最有效的是21bp siRNA。siRNA由正义链和反义链组成，两条链3’端均有2个碱基突出，一般为UU或dTdT，其中正义链的前19nt与靶基因序列相同。1. siRNA设计的原则SiRNA双链设计时，一般在靶mRNA起始密码下游100—200bp至翻译终止密码上游d0—100bp的范围内搜寻AA序列，并记录每个AA3’端相邻19个核苷酸作为候选si.RNA靶位点。其中AA（N19）TT是最理想的序列，若靶mRNA中无此序列，亦可
是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，你也要想到人家做质粒DNA转染时往往不会这么小心，难免将污染混入，那你岂不是很冤?多数情况下转染试剂都不建议自己分装，因为不同的管材可能会影响转染试剂的稳定性，那就更得不偿失了。所以RNA专用的转染试剂会更好一些。还有重要的一点就是要采用优质无RNAse污染的血清。 转染时的细胞汇合度常常会比DNA转染高一点，也许是因为RNA转染表达比DNA快?RNA转染的用量必须参考转染试剂
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