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- Duomi
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- 2025年12月31日
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1ml
Fast Pfu DNA Polymerase是从克隆有Pyrococcus furiosus DNA Polymerase基因的载体在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。Pfu DNA Polymerase具有5'→3'聚合酶活性和3'→5' 外切核酸酶活性（即校读活性），能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu DNA Polymerase是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率最低的。Fast Pfu DNA Polymerase是经过改造的聚合酶，在保真性不变的情况下扩增速度可达到2~4 kb/min。PCR产物为平端，可直接克隆于平滑末端的载体中，但如果使用去磷酸化载体，PCR片段必须进行5'端磷酸化处理；也可加A处理再与TA载体连接。适合于扩增保真度要求较高的片段。Fast Pfu PCR Master Mix加入了PCR扩增抑制剂的拮抗剂，使PCR反应扩增长度能达到12 kb，远高于常规Pfu的扩增长度。
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文献和实验-crack to help liberate the DNA. Check that the solution actually freezes. Overlay with a drop of mineral oil and incubate at 60°C for 60 minutes, followed by 95°C for 15 minutes. Cool to 4°C. Pipette 22.5 l of PCR master mix
这两个条件我们才可以选择快速反应模式。而 Standard Mode 和 Fast Mode 的主要区别在于不同模式下仪器升降温速率不同，快速模式下升降温速度更快。下图列举了当前部分用于基因表达和基因分型的 Master Mix 所支持的反应模式，供大家参考（图 4）。另外针对当前使用较为广泛的体外诊断试剂盒，如新冠检测试剂盒，大家在运行模式选择时需要根据试剂盒说明书做相应的设置，保证实验设置与试剂盒说明书一致。 图 4 常见基因表达和基因分型 master mix 支持反应模式整理
of source DNA material • It does not necessarily require the use of radioisotopes or toxic chemicals • It involves preparing the sample DNA and a master mix with primers[Primer: A short DNA or RNA fragment annealed to a singled-stranded DNA
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