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L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)试剂盒

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  • ￥1280
  • wksubio
  • WS0120F
  • 国内
  • 2025年07月20日
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    • 英文名：

      L-neneneba Galactonic Acid 1,4-Lactone Dehydrogenase (Gal LDH) Kit

    • CAS号：

      WS0120F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶（Gal LDH）试剂盒说明书
    （货号：WS0120F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    L-半乳糖途径是公认的植物 AsA 的主要合成途径。L-半乳糖内酯脱氢酶(L-galactono-1,4-lactone
    dehydrogenase, GaLDH, EC1.3.2.3)位于线粒体内膜，直接氧化 L-半乳糖内酯(L-galactono-1,4-lactone, Gal)生
    成 AsA, 是植物 AsA 生物合成途径中最后一步的关键酶。
    Gal LDH 催化 L-半乳糖内酯还原细胞色素 C(Cyt c)，还原型 Cyt c 在 550nm 有吸收峰；测定还原型 Cyt
    c 增加速率，来计算 Gal LDH 活性。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 50mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下或 4℃离心使试剂
    落入试管底部，再加 34mL 蒸
    馏水,两天内用完。
    试剂二
    粉剂×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下或 4℃离心使试剂
    落入试管底部，再加 3.5mL 蒸
    馏水，两天内用完。
    三、所需仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵。
    四、Gal LDH 活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样
    本和试剂浪费！
    1、样本制备
    称取约 0.1g 组织，液氮研磨之后，再加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，4℃×12000rpm，
    离心 15min，取上清置冰上待测。
    2、上机检测
    ① 分光光度计预热 30 min，调节波长到 550nm，蒸馏水调零。
    ② 试剂一，试剂二在 25℃水浴锅中预热 5 min。
    ③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
    试剂名称
    测定管
    样本
    60
    试剂一
    680
    试剂二
    60
    迅速混匀后于 550nm 比色，记录 10s 和 100s
    的吸光值 A1 和 A2，△A = A2﹣A1
    【注】如果△A 小于 0.005，延长反应时间到 200S 或者更长。
    五、结果计算
    1、 按蛋白浓度计算：
    酶活定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
    Gal LDH (μmol/min/mg prot) =[△A÷ε÷d×V2×106]÷（Cpr×V1）÷T
    =0.51×△A ÷Cpr
    2、按样本质量计算：本试剂盒仅供科研使用
    酶活定义：25℃中每克样品每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
    Gal LDH (μmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V2×106÷（W×V1÷V）÷T
    =0.51×△A ÷W
    ε----还原型 Cyt c 摩尔消光系数，17.3×103L/ mol/cm；
    d----光径(cm)，1cm；
    V2----反应体系总体积，800μL =0.8mL=0.0008L；
    106----1mol=1×106μmol；
    V1----加入反应体系中上清液体积，60μL=0.06mL；
    V----提取液体积，1 mL；
    T----反应时间，1.5min。
    Cpr----上清液蛋白浓度，mg/mL，建议使用本公司蛋白质含量 BCA 蛋白含量测定试剂盒。
    2

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