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硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)试剂盒

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  • ￥370
  • wksubio
  • WS6120F
  • 国内
  • 2025年12月29日
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    • 英文名：

      Thioredoxin Oxidoreductase (TrxR) Kit

    • CAS号：

      WS6120F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase, TrxR）活性试剂盒说明书
    （货号：WS6120F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    硫氧还蛋白还原酶（TrxR，EC 1.6.4.5）是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡
    啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR
    与GR 活性类似，催化GS SG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
    硫氧还蛋白还原酶（TrxR）催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412nm有特征吸收峰，
    通过测定412nm波长处TNB的增加速率即可计算TrxR活性大小。
    二、试剂盒组分与配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×2 支
    4℃保存
    用前甩几下或 4℃离心使试剂落
    入试管底部，每支再加 1.1mL 蒸
    馏水溶解；溶解后-20℃保存 2 周。
    试剂二
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    液体 2mL×1 支
    4℃保存
    固体出现可以 25℃水浴 5min,使
    其呈液体状态。
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、可调式移液
    器、蒸馏水
    四、硫氧还蛋白还原酶（TrxR）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备
    ① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离
    心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    ② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或
    细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，
    重复 30 次）；4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测
    ① 可见分光光度计预热 30 min，设置温度在 25ºC，设定波长到 412 nm，蒸馏水调零。
    ② 所有试剂在使用前均须在室温或 25℃水浴锅中温育 10min。
    ③ 在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    80
    试剂一
    40
    试剂二
    580
    试剂三
    40本试剂盒仅供科研使用
    2
    立即混匀，于 412nm 波长下 30s 时读取初始吸光度
    A1，10min 后再测一次吸光度 A2；ΔA= A2-A1。
    【注】：若ΔA 变化小，可延长反应时间 T（如延至 15min 或更长），或增加样本上样量 V1
    （如增至 100μL，则试剂二相应减少）；则改变后的 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按蛋白浓度计算：
    酶活定义：在 25ºC 下，每毫克蛋白每分钟还原 1nmol DTNB 生成 TNB 为一个酶活单位。
    TrxR 酶活(nmoL/min/mg prot)=(ΔA÷ε÷d×109×V2)÷(Cpr×V1)÷T×D=68×ΔA÷Cpr×D
    2、按样本质量计算：
    酶活定义：在 25ºC 下，每克样本每分钟还原 1nmol DTNB 生成 TNB 为一个酶活单位。
    TrxR 酶活(nmoL/min/g 鲜重)=(ΔA÷ε÷d×109×V2) ÷(W×V1÷V)÷T×D=68×ΔA÷W×D
    3、按细胞/细菌数量计算：
    酶活定义：在 25ºC 下，每 104个细胞/细菌样本每分钟还原 1nmol DTNB 生成 TNB 为 1
    个酶活单位。
    TrxR 酶活(nmoL/min/104 cell)= (ΔA÷ε÷d×109×V2)÷(500×V1÷V)÷T×D =0.14×ΔA×D
    ε---TNB 摩尔消光系数，1.36×104 L/mol/cm；
    d---光径，1cm；
    W---样本质量，g；
    V---提取液体积，1 mL；
    V1---样本体积，80μL =0.08mL；
    V2---反应体系总体积，740μL=7.4×10-4 L；
    D---稀释倍数，未稀释，即为 1；
    T---反应时间，10min，
    Cpr---上清液蛋白浓度（mg/mL）；建议使用本公司 BCA 蛋白质含量检测试剂盒;

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      产生少量溶菌酶，而 pLysE 宿主菌产生更大量酶。这些菌株用于在诱导前抑制 T7 RNA 聚合酶的基础表达，这样可以稳定编码影响细胞生长和活力的目标蛋白的 pET 重组体。带有 pLacI 的宿主菌产生额外的抑制 pETBlue 和 pTriEx 载体基础表达的 lac 阻遏蛋白。 λ DE3 溶原化试剂盒用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。 AD494 菌株为硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株，能够在胞浆内形成二硫键，提供了生产正确折迭的活性蛋白的潜力。 TrxB 突变可用

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