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- WS2020F
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- 2025年07月20日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Oxidized/Dehydroascorbic acid (DHA) content kit
- CAS号：
WS2020F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
24T
本试剂盒仅供科研使用
脱氢抗坏血酸（DHA）含量测定试剂盒说明书
（货号：WS2020F 分光法 24 样）
一、产品简介：
脱氢抗坏血酸被还原为还原型抗坏血酸，还原型抗坏血酸把三价铁离子还原成二价铁离
子，二价铁离子与红菲咯啉反应生成红色络和物，在 534nm 处有特征吸收峰，继而计算
得出样本中总抗坏血酸的含量；再通过直接检测样本得到还原型抗坏血酸含量。总抗坏血
酸含量减去还原型抗坏血酸含量即为样本中脱氢抗坏血酸含量。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂 a
液体 1.5mL×1 瓶
4℃保存
试剂 b
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂 c
液体 3mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
A：液体×1 支
试剂瓶 B(空瓶)
4℃保存
试 剂 二 B 液 配 制 ： 临 用 前 取
0.024mLA 液至试剂瓶 B 中，再加
4.97mL 无水乙醇，混匀备用。
试剂三
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
用前甩几下使粉体落入底部，再
加 9mL 无水乙醇混匀溶解（该试
剂难溶，可超声溶解）。
试剂四
液体 4.5mL×1 瓶
4℃保存
溶液为淡黄色。
标准品
粉剂×2 支
4℃保存
临用前：每支用前甩几下标准品
管，使粉剂落入底部，再加入
1mL 试 剂 一 混 匀 溶 解 ， 即 得
1mg/mL，再用试剂一稀释 100
倍为 0.01mg/mL 溶液即为标准
液（现配现用）。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、研钵、冰、低温离心机、无水乙醇、
可调式移液器和蒸馏水。
四、脱氢抗坏血酸（DHA）含量测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织(水分充足的果实样本取约 0.5g 组织或更多)，加入 1mL 预先预冷的提
取液，进行冰浴匀浆，室温静提 10min 后，12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上
待测。
【注】：若增加样本，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。本试剂盒仅供科研使用
2
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 534nm，蒸馏水调零。
② 取 0.1mL 上清液至新 EP 管中，加入 0.05mL 试剂 a 混匀，接着加入 0.4mL 试剂 b 混匀，
（此时整体液体为中性:PH 为 7-8），室温（25℃）下反应 10min，之后再加 0.1mL 试剂
c 混匀（此时整体液体为酸性:PH 为 1-2），此混合液为总抗坏血酸即 TAA 待检液。
③ 依次在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL） 测定管 1
测定管 2
标准管
（仅做一次）
空白管
（仅做一次）
上清液
300
TAA 待检液
300
标准液
300
提取液
300
试剂一
150
150
150
150
无水乙醇
150
150
150
150
试剂二 B 液
75
75
75
75
试剂三
150
150
150
150
试剂四
75
75
75
75
混匀，于 30℃反应 60min 后，立即取全部澄清液体（若有沉淀需 8000rpm，
室温离心 5min，取上清液）至 1mL 玻璃比色皿中，立即于 534nm 处读
取各管吸光值 A。
【注】1.若提取完的样本上清液有较强的背景色（如粉色，红色等），需增设一个样本自身对照：
即对照管为 300μL 各待检液体样本+200μL 试剂一+200μL 无水乙醇+100μL 试剂二 B 液
+300μL 无水乙醇，30℃反应 60min 后，剩余步骤同测定管，△A=A 测定-A 对照-A 空白。
2.若测定管大于 1.8，可对待检液体用试剂一进行稀释，或降低各待检液体样本量则试剂一
相应增加。则稀释倍数 D 或改变后的样本体积 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本质量计算
DHA (mg/g 鲜重) =[(A测2-A空白) ÷(A标准-A空白)] ×(C标准×V标准)÷(W×V1÷V) ×6.5×D-
[(A 测 1-A 空白) ÷(A 标准-A 空白)] ×(C 标准×V 标准)÷(W×V1÷V)×D
=0.01×[6.5×(A 测 2-A 空白) ×D-(A 测 1-A 空白) ×D] ÷(A 标准-A 空白)÷W
2、按液体体积计算：
DHA (mg/mL) =[(A 测 2-A 空白) ÷(A 标准-A 空白)] ×(C 标准×V 标准)÷V1×6.5×D-[(A 测 1-A
空白) ÷(A 标准-A 空白)] ×(C 标准×V 标准)
=0.01×[6.5×(A 测 2-A 空白) ×D-(A 测 1-A 空白) ×D]÷(A 标准-A 空白) ×D
V---加入提取液体积，1 mL；
V1--- 各待检液样本体积，0.3mL；
V 标准---加入标准液体积，0.3mL；
C 标准---标准液浓度，0.01mg/mL；
W---样品质量（
g）；
D---稀释倍数，若没有稀释即为 1。
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