土壤淀粉酶试剂盒,微板法

土壤淀粉酶试剂盒,微板法

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  • wksubio
  • WS8130W
  • 国内
  • 2025年08月07日
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    • 英文名

      Soil Amylase Kit

    • CAS号

      WS8130W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    土壤淀粉酶(Soil AmylaseS-AL)试剂盒说明书
    (货号:WS8130W 微板法 48 样)
    一、产品简介:
    土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂。淀粉酶可水解淀粉产生还原
    糖,本试剂盒采用 3,5-二硝基水杨酸与终产物还原糖反应生成棕红色物质,在 540nm 处有
    特征吸收峰,进而得到土壤淀粉酶活性。
    二、测试盒组成和配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    粉体 mg×1
    4℃保存
    临用前加入 60ml 试剂二,80℃水浴,
    搅拌至溶解,待用。
    试剂二
    液体 120mL×1
    4℃保存
    试剂三
    液体 12mL×EP
    4℃保存
    标准品
    粉剂 mg×1
    4℃保存
    若重新做标曲,则用到该试剂。
    三、所需的仪器和用品:
    酶标仪、96 孔板、天平、水浴锅、低温离心机、甲苯。
    四、土壤淀粉酶(S-AL)活性检测:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本处理:
    取新鲜土样或风干土壤,先粗研磨,过 40 目筛网,待测备用。
    【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
    2、上机检测:
    ① 培养:在 EP 管依次加入:
    试剂(
    μL
    测定管
    对照管
    土样(
    g
    0.1
    0.1
    甲苯
    40
    40
    25℃静置 15min
    试剂一
    1000
    试剂二
    1000
    充分混匀,37℃培养 1h12000rpm25℃离心 10min,上清液待用
    ② 酶标仪预热 30min 以上,调节波长为 540nm
    ③ 显色反应:在 EP 管中依次加入:
    上清液
    200
    200
    试剂三
    100
    100
    混匀,95℃水浴 5min,待冷却后,取 200μL 96 孔板中,
    540nm 处读取吸光值 A,△A=A 测定管-A 对照管。
    【注】若A 在零附近徘徊,可增加土样质量(如增至 0.2g),或延长培养时间(如增至 3h 或更长),
    则改变后的土样质量和反应时间 T 代入公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、标准曲线方程:y = 2.5454x - 0.0704x 为标准品质量(mg/mLy A本试剂盒仅供科研使用
    2
    2、酶活单位定义:每克土样每小时催化生成 1μg 葡萄糖为一个酶活力单位。
    S-AL(μg/h/g 土样)=[(A+0.0704)÷ 2.5454×103×V]÷W÷T
    =408.6×(A+0.0704)÷W
    V---反应总体积,1040μL=1.04mL
    T--反应时间,1h
    W--土壤样本实际取样量,g
    附:标准曲线制作过程:
    1 制备标准品母液(
    1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL
    蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在两天内用且-20℃保存)。
    2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. 0.6. 0.7.mg/mL
    也可根据实际样本来调整标准品浓度。
    3 在显色反应阶段,按照测定管加样表操作,依据结果即可制作标准曲线。

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