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- 赛泓瑞生物
- 进口
- SHC814H
- 2025年07月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
SHCC
- 运输方式：
干冰/常温
- 年限：
10年
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
1*10^6cell/T25
| 种属 | 人 |
| 别称 | SMMC7721+GFP |
| 疾病 | 肝癌 |
| 传代比例/细胞消化 | 1:2传代，消化2-3分钟 |
| 完全培养基配置 | RPMI1640培养基；10%胎牛血清；1%双抗 |
| 形态 | 上皮细胞样 |
| 生长特征 | 贴壁生长 |
| 倍增时间 | 每周2 至 3 次 |
| STR | Amelogenin：X；CSF1PO：10；D13S317：13.3，15.1；D16S539：9，10；D18S51：16；D19S433：13；D21S11：27，28；D2S1338：17；D3S1358：15，18；D5S818：11，12；D7S820：12；D8S1179：12；FGA：18，21；TH01：7；TPOX：12；vWA：16，18； |
| 培养条件 | 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 |
| 冻存条件 | 冻存液：90%FBS，DMSO 10%, 或使用非程序冻存液：官网货号SH-H040 |
| 备注 | 该细胞是通过慢病毒转染荧光素酶的稳转株，收到细胞传代8代左右后，若要求需要维持荧光强度，建议可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。 |
| 产品使用 | 仅限于科学研究，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 |
1）复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
- 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
a、收集细胞，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
南京赛泓瑞生物科技有限公司专注于是一家专注于研发和生产原代细胞、肿瘤细胞及细胞培养相关试剂产品的生物高科技企业，可以为各类研究机构提供符合标准规范的原代细胞、肿瘤细胞及相关实验技术服务；
南京赛泓瑞生物科技有限公司有一支由南京大学和南京医科大学多名博士组成的研发团队，致力于为您的细胞研究及细胞培养实验提供高品质、稳定性良好的产品，做“您身边的细胞培养专家”。细胞培养提供全程服务，产品涵盖原代细胞、细胞系、免疫细胞及干细胞、胎牛血清、无血清非程序冻存液、完全培养基、基础培养基、“支原体”/“黑胶虫”清除试剂、细胞因子、胰酶、双抗等细胞培养及实验相关产品。
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文献和实验的转染方法进行细胞转染。包括：磷酸钙转染、脂质体转染、电穿孔转染等。您可以购买市售的商品化转染试剂并且参照供应商说明书进行细胞转染实验。 步骤6 ：观测GFP 荧光和稳定表达细胞系筛选 如果细胞转染成功，并且您使用了带GFP的载体，根据细胞生长速度的不同，在转染后3-5天能在荧光显微镜下观察到细胞发出绿色荧光。请注意，绿色荧光蛋白的表达表明转染细胞成功，不能说明RNA干扰实验成功。 如果您使用了带有真核抗性标签如Neo-R的载体，这时您可以加入合适浓度
HindIII和EcoRI双酶切。空载体酶切产物长度为235 bp，阳性克隆酶切产物长度为288 bp。 鉴定正确的克隆可以用引物M13R-48测序验证插入的寡核苷酸序列是否正确无误。 步骤5：转染细胞 pRI系列载体可用常用的转染方法进行细胞转染。包括：磷酸钙转染、脂质体转染、电穿孔转染等。您可以购买市售的商品化转染试剂并且参照供应商说明书进行细胞转染实验。 步骤6：观测GFP荧光和稳定表达细胞系筛选 如果细胞转染成功，并且您使用了带GFP的载体
-Glu-Glu-Asp-Leu，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。C-Myc tag已成功应用在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。 eGFP eGFP标签蛋白，是增强型绿色荧光蛋白eGFP,激发波长为488nm，发射波长为507nm，其是由野生型绿色荧光蛋白GFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。相对于GFP，eGFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建
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