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- 2025年08月18日
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北京百泰派克生物科技有限公司
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外泌体提取原理
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外泌体提取原理及其技术方法
外泌体是由细胞主动分泌的纳米级囊泡（30-150 nm），携带dànbáizhì、核酸和脂质等生物活性分子，在细胞间通讯中发挥重要作用。外泌体提取原理的核心在于利用其物理化学特性（如大小、密度、表面标志物）或生物学特性（如亲和结合）从复杂生物样本中分离纯化。由于外泌体与其他细胞外囊泡（如微泡、凋亡小体）在尺寸和密度上存在重叠，高纯度提取需结合多种技术手段。目前主流方法包括超速离心法、尺寸排阻色谱法、聚合物沉淀法、免疫亲和捕获法以及微流控技术，每种方法均基于外泌体提取原理的不同维度进行优化，但均需权衡得率、纯度和操作便捷性。
超速离心法是zuì经典的外泌体提取方法，其外泌体提取原理依赖于差速离心与密度梯度离心的组合。低速离心（如300×g）先去除细胞碎片，后续逐步提高转速（如10,000×g去除微泡）后，zuì终通过超速离心（100,000×g以上）沉淀外泌体。密度梯度离心可进一步提高纯度，利用蔗糖或碘克沙醇梯度分离不同密度的囊泡。该方法虽成本较高且耗时，但因无需额外标记，被广泛用于基础研究。聚合物沉淀法（如PEG-based试剂）的外泌体提取原理则通过疏水作用或空间位阻效应使外泌体从溶液中析出，操作简便但可能共沉淀污染物。
免疫亲和捕获法基于外泌体提取原理中的表面标志物（如CD9、CD63、CD81）特异性，通过抗体修饰的磁珠或色谱柱实现靶向分离。该方法纯度较高，但可能遗漏低表达标志物的外泌体亚群。尺寸排阻色谱法依据外泌体粒径大于可溶性蛋白的特性，利用多孔凝胶基质实现分离，条件温和且保留外泌体完整性，但处理量有限。新兴的微流控技术整合了外泌体提取原理中的尺寸筛选、声波或介电泳力场，可实现自动化高通量提取，具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。
常见问题：
Q1. 超速离心法是否会导致外泌体结构损伤？
A：长时间高g力离心可能引起外泌体膜破裂或内容物泄漏，建议优化离心时间（通常2-4小时）并采用低温离心（4℃）。密度梯度离心可部分缓解机械应力，但需避免梯度介质渗透压过高。
Q2. 如何评估不同提取方法的外泌体纯度？
A：除电镜观察形态和粒径分析外，需联合Western blot检测外泌体标志蛋白（如TSG101、Alix）及阴性标志物（如Calnexin）。外泌体提取原理上，纳米流式细胞术可定量分析单囊泡水平的表面标志物表达。
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文献和实验间充质干细胞外泌体（MSC EXOs）近年来已经在伤口愈合、神经损伤、肝病以及新冠肺炎等领域被广泛研究应用。不少研究表明，在各种损伤和疾病模型中，MSC EXOs 可以作为间充质干细胞的替代选择。 第四军医大学去年就在干细胞领域权威期刊 Stem Cell Research & Therapy 发表文章 [1]，发现 MSC EXOs 逆转肝纤维化，是间充质干细胞（MSCs）治疗肝脏疾病的重要机制。MSC EXOs 正逐渐成为再生医疗领域的「新武器」，也为临床疾病研究提供新思路。
外泌体（Exosomes）作为当前科研界的热度话题，很多人觉得它很神秘，不知道它在疾病治疗或发生、发展中扮演什么样的角色，今天我们跟大家一起基于文献来探讨一下外泌体具有的功能。 先回顾一下外泌体的基础知识。外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其大小为 30-150 nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。 所有的细胞都能分泌外泌体，但是不同细胞分泌的外泌体不管在数量
细胞上清外泌体细胞上清外泌体提取图解过程 1.核对样本 2.离心，3000g，15min； 3.离心后样本（有略微沉淀） 4.将样本转移至新的 50ml 管并加 ECS 试剂; ECS 与试剂有明显分层； 震荡混匀； 5.在 4 度冰箱静置 2H 以上，离心 10000g，60min； 6.离心后的样本（沉淀明显，沉淀中富含外泌体） 将上清吸出留下沉淀，将离心管倒扣于纸上自然晾干残留的上清液； 7.加 PBS 重悬沉淀； 用 PBS 洗脱后的沉淀 8.离心进一步去除
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