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北京百泰派克生物科技有限公司
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蛋白质质谱检测鉴定
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dànbáizhì质谱检测鉴定的技术与应用
在现代生命科学研究中,dànbáizhì质谱检测鉴定已成为解析dànbáizhì组成、结构及功能的核心技术。该技术通过将dànbáizhì分子转化为气态离子,利用质荷比(m/z)的差异进行分离和检测,从而实现对dànbáizhì的高通量、高精度鉴定。其应用范围涵盖基础研究、临床诊断、药物开发及生物标志物发现等多个领域。dànbáizhì质谱检测鉴定的核心优势在于其高灵敏度和高分辨率,能够检测低丰度dànbáizhì,并提供翻译后修饰(如磷酸化、糖基化)的jīngquè位点信息。
dànbáizhì质谱检测鉴定通常基于两种主要策略:niǎoqiāng法(Shotgun)和自上而下(Top-down)策略。niǎoqiāng法先将dànbáizhì酶解为肽段,再通过液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)分析,适用于复杂样本的高通量鉴定。而自上而下策略则直接分析完整dànbáizhì,更适合研究dànbáizhì的完整形态及翻译后修饰。近年来,高分辨率质谱仪(如Orbitrap、TOF/TOF)的发展显著提升了dànbáizhì质谱检测鉴定的覆盖率和准确性。此外,数据依赖性采集(DDA)和数据非依赖性采集(DIA)等技术的优化,进一步提高了定量dànbáizhì组学的可重复性。
在临床应用中,dànbáizhì质谱检测鉴定已成为疾病标志物筛选和jīngzhǔn医疗的重要工具。例如,通过比较健康与疾病样本的dànbáizhì组差异,可发现潜在的诊断标志物或治疗靶点。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。此外,该技术还可用于药物代谢研究,通过监测药物与靶蛋白的相互作用,优化药物设计。
常见问题:
Q1. dànbáizhì质谱检测鉴定中,如何提高低丰度dànbáizhì的检出率?
A:可采用预分级策略(如高丰度蛋白去除或亚细胞组分分离)结合高灵敏度质谱仪(如Orbitrap Exploris 480)。此外,数据非依赖性采集(DIA)模式可减少离子丢失,提高低丰度肽段的检测概率。
Q2. 在翻译后修饰分析中,如何降低假阳性鉴定率?
A:需结合严格的搜库参数(如PTM-specific score cutoff)和验证实验(如合成修饰肽段验证)。使用修饰富集技术(如TiO2富集磷酸化肽段)也能显著提高信噪比,减少假阳性。
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文献和实验注:如同时要求外泌体抽提、鉴定及蛋白质组学,请将样本要求量进行加和。 备注:请明确提供的样本体积。细胞上清及尿液,超过 50ml,每 50mL 算作一个 1 个样本,以此计算样本数,核算抽提周期。血清、血浆、关节液、脑脊液进行超速离心,每 5mL 算作 1 个样本,以此计算样本数,核算抽提周期。
蛋白质鉴定工具 蛋白质鉴定意味着将实验测定的蛋白质性质和可以利用计算机手段从一个数据库得到的蛋白质性质进行比较。考虑到这些不同的性质,已经开发了一大批蛋白质鉴定工具,如氨基酸组成、序列标签或质谱衍生的数据等,所有的这些工具都是通过与蛋白质数据库中的某一个蛋白质条目提供最佳的匹配来达到鉴定蛋白质的目的。 以PMF和MS/MS为基础的蛋白质鉴定工具只能对部分实验信号进行注释或解释。当前已有的工具能够寻找肽的氨基酸序列,某些修饰应予考虑。这些修饰包括那些已知的由实验
基于质谱的蛋白质鉴定,第6节:MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备
物干燥,连续洗涤使用预制型的薄层基质。该方法为精确和灵敏的MALDI检测创造了最佳条件。然而,这种样品制备方法制备的样品不能承受激光辐射,会被迅速漂洗。因此,该方法不适用于PSD光谱的蛋白质谱鉴定,因为PSD光谱法通常每个片段质量范围需要多达100甚至以上次数反复的激光辐射。 如果在分析之前,使用小型吸附柱对较大体积的肽混合物进行浓缩,抑或通过向肽混合物中添加少量反相色谱珠的方式进行批量吸附。而进行批量吸附,只需要将磁珠吸附到的肽混合物进行洗涤,即可获得肽混合物,然后转移至上样处并干燥即可。这种
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