检测蛋白质互作技术有哪些

检测dànbáizhì互作技术有哪些

 

在分子生物学和dànbáizhì组学研究中，检测dànbáizhì互作技术有哪些是解析dànbáizhì功能、信号通路及分子机制的核心手段。目前，主流技术可分为体外、体内及计算预测三大类，每种方法各具优势，适用于不同研究场景。

 

1. 酵母双杂交系统（Y2H）

酵母双杂交系统是经典的检测dànbáizhì互作技术之一，基于转录因子模块化设计，将目标蛋白分别与DNA结合域（BD）和转录激活域（AD）融合。若两蛋白相互作用，则重构转录因子激活报告基因表达。该系统灵敏度高，适用于大规模筛选，但可能存在假阳性（如非生理性互作）。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。

 

2. 免疫共沉淀（Co-IP）与 pull-down 技术

免疫共沉淀利用特异性抗体捕获靶蛋白及其互作复合物，随后通过Western blot鉴定结合蛋白，适用于天然生理条件下的检测dànbáizhì互作技术有哪些。Pull-down 则通过固相化标签（如GST、His）纯化重组蛋白，探究其与溶液蛋白的互作。两者均需结合质谱进一步验证互作网络。

 

3. 荧光共振能量转移（FRET）

FRET 是一种高时空分辨率的检测dànbáizhì互作技术有哪些，供体荧光蛋白（如CFP）与受体荧光蛋白（如YFP）距离小于10 nm时发生能量转移。通过荧光信号变化可实时监测活细胞内的dànbáizhì互作动态，但需jīngquè控制荧光蛋白的标记位置以避免干扰。

 

4. 表面等离子共振（SPR）

SPR 通过检测生物分子结合引起的折射率变化，量化dànbáizhì互作的动力学参数（如结合常数Ka、解离常数Kd）。该技术无需标记，但设备成本较高。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。

 

5. 邻近标记技术（如BioID、APEX）

这类检测dànbáizhì互作技术有哪些利用工程酶（如shēngwùsù连接酶）在互作蛋白邻近区域标记shēngwùsù，随后通过链霉亲和素富集并鉴定互作蛋白。尤其适用于弱或瞬时的相互作用研究，但需注意酶活性可能受细胞微环境影响。

 

6. 交联质谱（XL-MS）

通过化学交联剂固定dànbáizhì复合物，结合质谱分析交联肽段，提供互作界面结构信息。该检测dànbáizhì互作技术有哪些适用于复杂体系，但交联效率与数据分析难度较高。

 

7. 计算预测方法

基于序列、结构或进化信息的算法（如AlphaFold-Multimer）可预测dànbáizhì互作，但其结果需实验验证。这类检测dànbáizhì互作技术有哪些常用于辅助实验设计。

 

常见问题：

Q1. 如何选择适合弱相互作用研究的检测dànbáizhì互作技术有哪些？

A：邻近标记技术（如BioID）或交联质谱（XL-MS）更适用，因其可捕获低亲和力或瞬时互作。若需活细胞动态数据，可结合FRET优化检测条件。

 

Q2. 酵母双杂交系统为何易出现假阳性？如何缓解？

A：假阳性可能源于报告基因的自激活或非特异性结合。可通过多重报告基因验证、引入阴性对照，或改用分裂泛素系统（如mbSUS）提高特异性。