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上海维亦特生物
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文献和实验CANDOR BIOSCIENCE: 关于ELISA板稳定性的技术探讨与比较
,因为捕获分子通常使用大量过剩。 即使在成功包被后,错误折叠也会因为时间和温度的变化而发生。随着时间的推移,包被分子会失去结合待测物的能力。如果包被板是预期保质期为几年的诊断试剂盒的一部分,则最先进的稳定性对于其性能维持至关重要。否则,由于信噪比降低和潜在的非特异性相互作用,试剂盒的性能会随着捕获分子的错误折叠而降低,从而导致假阴性和假阳性。尤其是单克隆抗体在表面上的稳定性通常较低。在抗原下降分析中,一些包被抗原在不添加稳定剂的情况下,4℃储存两周后会失去捕获待测物的能力。 因此,在开发
样品和抗体稀释,这些亲和力鉴别溶液可以消除基于低或中等亲和力结合的所有干扰,同时保持特定信号。因此,它们大大减少了背景,提高了信噪比,并提高了结果的再现性(Fig.2)。与仅防止干扰性抗体干扰的HAMA阻断剂不同,LowCross Buffer®能够消除上述各种干扰。因此,这种基于亲和力鉴别的稀释剂可用于任何受到干扰的免疫分析。无需对分子基础进行耗时的更深入的研究,也无需仔细选择和滴定不同的HAMA阻断剂。在分析过程中,所有的结合反应都必须在亲和选择性条件下进行。由于许多诊断试剂盒需要长时间储存
酶的ELISA试剂盒中使用的洗板液一般为含0.05% Tween20的中性PBS,Tween20为一种非离子去垢剂,既含亲水基团,也含疏水基团,其在洗涤中的作用机理是,借助其疏水基团与经疏水性相互作 用被动吸附于聚苯乙烯固相上蛋白的疏水基团形成疏水键,从而削弱蛋白与固相的吸附,同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下,促使蛋白质脱离固相而进 入液相,这样就可达到去掉非特异吸附物的目的,但由于抗体或抗原的包被通常也是通过在碱性条件下与固相的疏水性相互作用而被动吸附于固相,因此要注意非离 子去垢剂的使用
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