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依诺赞(江苏)生物科技有限公司
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10rxns
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文献和实验异源蛋白质在细菌中表达是目前使用的主要的蛋白生产系统。大肠杆菌一直是最经济的系统之一。然而为了生产需要特异修饰、胞外分泌或有特异折叠需要的蛋白质,其他表达系统也是需要的。真核细胞在表达原核来源的基因、真核基因的cDNA拷贝或其他无内含子的基因时可能表现很多特异问题。富含AT的基因在很多真核细胞中表达时会遭遇很剧烈的障碍。主要的真核信号序列如 加poly-A的位点、酵母转录终止位点和真核mRNA去稳定序列都是富含AT的。内含子序列也趋向于富含AT,尽管他们有参与剪切过程的很特异的识别
从Yeast Two-Hybrid中筛出一个蛋白,体外实验很成功,但在293中表达不成功. 已经尝试了多种载体,包括pCMV-tag 3B,pcDNA3,pcDNA3.1,检测不到蛋白的表达.钙转和脂质体都用过. 虚心求教!
蛋白纯化的方法很多,如层析法、电泳法、超离心法、超滤等,其中蛋白质亲和层析法通常只需要一步操作便能将目标蛋白从混合物中分离出来,且纯度很高,因而备受实验者的青睐。 在进行蛋白表达时,选择合适的标签有利于蛋白的纯化,促进蛋白的可溶性,因此了解几种常用的蛋白纯化标签很重要。一般来说,常用的蛋白纯化标签主要有 His tag、GST tag、MBP tag、NusA tag、Strep tag 等,那么这些蛋白纯化标签有什么不同之处呢? His tag(组氨酸标签) 融合蛋白是目前最常用的表达
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