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细胞周期检测实验

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    细胞周期检测 实验原理
    细胞周期( Cell Cycle )是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程, 细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能( G0期)。

    流式细胞仪PI染色法检测细胞周期的原理:由于细胞周期各时相的DNA含量不同,通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。

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      ,一定要保证检测时细胞尚有合理的生长空间。 03 正常体细胞周期检测出现 8 倍体或 4 倍体比例过高 大多数情况下,哺乳动物的正常体细胞为 2 倍体或 4 倍体,且 G0/G1 期比例远高于 G2/M 期。当正常体细胞周期检测出现 8 倍体,或 4 倍体比例过高时,多为粘连体导致,因此在进行细胞周期实验时,需采用 PI-A + PI-H 来排除粘连体,才能得到正确的结果。

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      实验目的 掌握细胞计数的方法。 了解区分细胞存活状态的方法。 实验用品 0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉 普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。 实验原理 在细胞培养工作中,常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活,确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度,如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别,冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后,常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色,进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞

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