iFluor 405 Styramide

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入HRP标记的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

过氧化物酶标记

Styramide标记

复染和荧光成像

表1.建议用于核复染色的产品。 

图示

图 1. 用兔抗微管蛋白一抗标记的 HeLa 细胞的荧光图像。然后用 HRP 标记的山羊抗兔 IgG 二抗和 iFluor 405 Styramide对细胞进行染色。使用 DAPI 过滤片组拍摄荧光图像。

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 参考文献