iFluor 610 Styramide

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荧光显微镜
Ex:	Cy3/TRITC滤波片组
Em：	Cy3/TRITC 滤波片组
推荐孔板:	黑色透明底板

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入HRP标记的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

Styramide标记

复染和荧光成像

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号	产品名称	Ex/Em(nm)
17548	核蓝 DCS1	350/461
17550	核绿 DCS1	503/526
17551	核橙 DCS1	528/576
17552	核红 DCS1	642/660

 

图示

图 1. 使用 PSA 扩增方法对甲醛固定、石蜡包埋的人肺腺癌阳性组织进行荧光 IHC。人肺腺癌阳性组织切片用小鼠抗 EpCAM 或对照小鼠 IgG 抗体染色，然后用 polyHRP 标记的山羊抗小鼠 IgG 二抗孵育，然后用 iFluor 610 Styramide （Cat#44904）孵育。

 

相关产品

名称	激发（nm）	发射（nm）	消光系数（cm -1 M -1）	量子产率
iFluor 488 Styramide * Alexa Fluor 488酪酰胺的优异替代品*	491	516	75000	0.9
iFluor 555 Styramide * Alexa Fluor 555酪酰胺的优异替代品*	557	570	100000	0.64
iFluor 568 Styramide * Alexa Fluor 568酪酰胺的优异替代品*	568	587	100000	0.57

 参考文献