Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒

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荧光酶标仪
Ex:	340/380 nm
Em：	510 nm
Cutoff：	470 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	底部读取/分液处理

样品实验方案

简要概述

1. 在生长培养基中准备细胞
2. 添加Fura-2 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
3. 在室温下孵育1-2小时
4. 检测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Fura-2 AM储备溶液：将200 µL DMSO加入小瓶Fura-2 AM（组分A）中，并充分混合。 注意：20 µL Fura-2 AM储备溶液足以装满一块板。 如果试管密封严密，可将未使用的Fura-2 AM储备溶液分装并在<-20℃下保存超过一个月。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36320（10板试剂盒），通过将9mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。
b）对于＃36321（100个板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X分析缓冲液。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Fura-2 AM染料加载溶液：将20 µL Fura-2 AM储备溶液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Fura-2 AM染料加载溶液添加到细胞板中。 注意：如果您的化合物干扰血清，则需要用HHBS缓冲液代替生长培养基。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育20分钟。 注意：如果测定需要37℃，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

4.通过监测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm处的荧光增加来进行钙通量测定。 注意：在实验前进行信号测试非常重要。 不同的仪器具有各自的强度范围。 注意：对于在FDSS上进行的测定，请在仪器上对Fura-2钙测定使用标准滤波器。
 

图示

图1.用Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒测量的CHO-K1细胞中的ATP剂量反应。 将CHO-K1细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 将细胞与100 µL Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒在室温下孵育1小时。 通过FlexStation（分子设备）添加ATP（50 µL /孔）以达到指示的浓度。

 

 

参考文献

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