Cell Meter 磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（200 µL /样品）
2. 添加Apopxin 紫色500测定溶液
3. 在室温下孵育30至60分钟
4. 使用带有525/40 nm滤光片（AmCyan通道）的流式细胞仪或带有紫色滤光片组的荧光显微镜分析细胞

实验步骤

1.用Apopxin Violet 500制备和孵育细胞：

1.1用测试化合物处理细胞一段时间（对于用星形孢菌素处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.2离心细胞以获得1-5×10⁵细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液（组分B）中。

1.4向细胞中加入2 µL Apopxin 紫色500（组分A）。

1.5可选：向坏死细胞中加入2µL 100X碘化丙啶（组分C）。

1.6避光保存，于室温下孵育30至60分钟。

1.7在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，添加300 µL分析缓冲液（组分B）以增加体积。

1.8使用带有525/40 nm滤光片的流式细胞仪（AmCyan通道）或带有紫色滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。

2.通过使用流式细胞仪进行分析：

2.1使用带有525/40 nm滤光片（AmCyan通道）的流式细胞仪定量Apopxin Violet 500。 将碘化丙啶加入细胞后，使用610/20 nm滤光片（PE-Texas red通道）检测细胞活力。 注意：由于对细胞的分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤，因此不对贴壁细胞的Apopxin 结合流式细胞术进行常规测试。 

3.通过使用荧光显微镜进行分析：

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到载玻片上。 注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。 与Apopxin Violet 500孵育后，用Assay Buffer冲洗1-2次，然后将Assay Buffer加到盖玻片上。 将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。 与Apopxin Violet 500孵育后，还可以将细胞固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。

3.3在带有紫色滤光片的荧光显微镜下，用Apopxin 紫色500分析凋亡细胞。当碘化丙啶添加到细胞中时，使用TRITC滤波片检测细胞活力。 质膜上的蓝色染料表明Apopxin Violet 500与细胞表面的PS结合。

参考文献

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