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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit *Blue Fluorescence Excited at 405 nm*
- 库存:
50
- 供应商:
广州市左克生物科技发展有限公司
- 规格:
100Tests
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸(PS)的转运来检测细胞凋亡。在细胞凋亡中,PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标,可以在观察形态变化之前进行检测。该试剂盒中使用的我们专有的Apopxin PS指示剂是基于小分子的PS指示剂。 PS指示剂与膜PS结合后具有蓝色荧光。试剂盒中使用的PS染料具有与PacificBlue®(PacificBlue®是Invitrogen的商标)相似的光谱特性。蓝色荧光染料在405nm处被紫色激发光充分激发,并在〜450 nm处发出强烈的蓝色荧光。该试剂盒经过优化,可与配备了紫色激发光的流式细胞仪一起使用。它特别适用于细胞的多色流式细胞术分析。,为您提供优质的Cell Meter 磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒。
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| Ex: | 405 nm |
| Em: | 450/40 nm |
| 通道: | Pacific Blue 通道 |
|
荧光显微镜 |
|
| Ex: | Violet 滤波片组 |
| Em: | Violet 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
样品实验方案
简要概述
- 用测试化合物制备细胞(200 µL /样品)
- 添加Apopxin 紫色450分析溶液
- 在室温下孵育30至60分钟
- 使用带有450/40 nm滤光片(Pacific Blue通道)的流式细胞仪或带有紫色滤光片的荧光显微镜分析细胞
实验步骤
1.用Apopxin 紫色450准备和孵育细胞:
1.1用测试化合物处理细胞一段时间(对于用星形孢菌素处理过的Jurkat细胞,需要4-6小时)以诱导细胞凋亡。
1.2离心细胞以获得1-5×105细胞/管。
1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液(组分B)中。
1.4向细胞中加入2 µL Apopxin 紫色450(组分A)。
1.5可选:向坏死细胞中加入2 µL 100X碘化丙啶(组分C)。
1.6避光保存,于室温下孵育30至60分钟。
1.7在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,添加300 µL分析缓冲液(组分B)以增加体积。
1.8使用带有450/40 nm滤光片的流式细胞仪(Pacific Blue通道)或带有紫色滤光片的荧光显微镜检测荧光强度。
2.通过使用流式细胞仪进行分析:
2.1使用带有450/40 nm滤光片(Pacific Blue通道)的流式细胞仪定量Apopxin Violet 450结合物。 将碘化丙锭加入细胞后,使用610/20 nm滤光片(PE-Texas Red通道)测量细胞活力。 注意:由于对细胞的分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤,因此不对贴壁细胞的Apopxin 结合流式细胞术进行常规测试。
3.通过使用荧光显微镜进行分析:
3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后用测定缓冲液重悬细胞。
3.2将细胞添加到载玻片上。 注意:对于贴壁细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。 与Apopxin Violet 450孵育后,用Assay Buffer冲洗1-2次,然后将Assay Buffer加到盖玻片上。 将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。 与Apopxin Violet 450孵育后,还可以将细胞固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。
3.3在带有紫色滤光片的荧光显微镜下,用Apopxin 紫色450分析凋亡细胞。 当碘化丙啶添加到细胞中时,使用TRITC滤波片检测细胞活力。 质膜上的蓝色染色表明Apopxin Violet 450与细胞表面的PS结合。
参考文献
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Journal: Ultrasound Med Biol (2009): 144
Mobilization of lysosomal calcium regulates the externalization of phosphatidylserine during apoptosis
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Peptidic targeting of phosphatidylserine for the MRI detection of apoptosis in atherosclerotic plaques
Authors: Burtea C, Laurent S, Lancelot E, Ballet S, Murariu O, Rousseaux O, Port M, V and er Elst L, Corot C, Muller RN.
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文献和实验结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构(图2);Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。 二、磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法) 磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞
),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体(图1)。3、透射电子显微镜观察结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构(图2);Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。二、磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法) 磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine
悬液,先用PI染色,再行Hoechest3342染色,进行流式细胞仪分析或荧光显微镜观察。PI及Hoechest3342均使用340nm紫外线激发,前者荧光为红色(620nm),后者荧光为蓝色(480nm)。正常细胞蓝色最强。早期凋亡细胞由于DNA的漏出蓝色稍弱并有少量的红色荧光,晚期凋亡细胞红色荧光加强。坏死细胞红色荧光最强。 膜联蛋白(annexin)V标记 正常细胞的细胞膜磷脂分布是不对称的,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)位于细胞膜内侧,在细胞凋亡时转至细胞膜外
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